日本血吸虫磷酸甘油酸激酶基因T／A克隆及序列分析

目的获取日本血吸虫磷酸甘油酸激酶(SjPGK)编码基因片段，分析其核苷酸序列，为日本血吸虫病疫苗研制提供候选抗原分子。方法根据曼氏血吸虫磷酸甘油酸激酶(SmPGK)cDNA序列设计1对引物，采用逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)方法，从日本血吸虫成虫总RNA中扩增SjPGK基因片段。利用T／A克隆法，将其克隆人pMD18-T载体，经双酶切分析和PCR鉴定，将阳性克隆进行脱氧核糖核酸序列测定；运用Blast程序，将测序结果及其推导的编码氨基酸序列与NCBI数据库在核苷酸水平和氨基酸水平进行同源性比较。结果RT—PCR特异性扩增出1条长约830bp大小的条带；经酶切和PCR鉴定表明所构建的质粒pMD18-T—SjPGK中含有所扩增的基因序列；脱氧核糖核酸序列测定和分析，SjPGK基因片段长为830bp，与SmPGK的核苷酸同源性为85％，分值为672；氨基酸同源性为94％，分值为473。结论成功克隆SjPGK编码基因片段，为进一步实验提供了条件。