miR-21-5p对川崎病内皮细胞焦亡的作用及其机制研究

目的探究miR-21-5p对川崎病（KD）内皮细胞焦亡的作用及其机制。方法采用随机数字表法将16只C57BL/6小鼠分为KD组和PBS组，每组8只。利用干酪乳杆菌细胞壁提取物（LCWE）腹腔注射小鼠，构建KD模型。利用LC-WE处理小鼠冠状动脉内皮细胞（MCAECs），构建KD体外细胞模型。在使用LCWE处理的基础上，根据转染miR-21-5p抑制剂（miR-21-5pinhibitor）或inhibitor阴性对照物（inhibitor-NC）、miR-21-5p模拟物（miR-21-5pmimics）或mimics阴性对照物（miR-NC）、用或不用含NLR家族Pyrin域蛋白3（NLRP3）抑制剂MCC950，将MCAECs分组为：（1）LCWE组和对照组；（2）LCWE+inhibitor-NC组和LCWE+miR-21-5pinhibitor组；（3）LCWE组、LCWE+MCC950组、LCWE+MCC950+miR-NC组和LCWE+MCC950+miR-21-5pmimics组。采用HE染色观察小鼠冠状动脉组织病理学变化；采用qRT-PCR法检测miR-21-5p表达变化；采用Westernblot检测焦亡相关蛋白NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1（caspase-1）、caspase-1前体（pro-caspase-1）、消皮素D蛋白（GSDMD）p30、IL-1β、IL-18的蛋白表达；采用细胞计数盒法检测细胞活力；采用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测LDH活性。结果与PBS组相比，KD组小鼠冠状动脉组织病变明显，冠状动脉组织中NLRP3介导的细胞焦亡、miR-21-5p表达水平均升高（均P＜0.01）。与对照组相比，LCWE组MCAECs细胞活力明显降低并且miR-21-5p表达水平明显升高（均P＜0.01）。与LCWE+inhibitor-NC组相比，LCWE+miR-21-5pin-hibitor组细胞miR-21-5p表达水平、NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMDp30、IL-1β、IL-18的蛋白表达以及LDH活性均明显降低（均P＜0.01），而细胞活力明显升高（P＜0.05）。与LCWE组相比，LCWE+MCC950组NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMDp30、IL-1β、IL-18的蛋白表达以及LDH活性均明显降低（均P＜0.01），且细胞活力明显升高（P＜0.01），而进一步转染miR-21-5pmimics明显逆转了以上变化（均P＜0.01）。结论在KD中，miR-21-5p通过激活NLRP3炎症小体调节血管内皮细胞焦亡，从而加剧血管内皮细胞损伤。提示抑制miR-21-5p可以部分改善KD期间的血管内皮细胞损伤，miR-21-5p可以作为治疗KD的潜在干预靶点。