| 三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR与ELISA检测弓形虫的比较 |
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| 引用本文： | 赵东岳,黄翠琴,王琨,温福利,岳良平,王寿昆,林旋.三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR与ELISA检测弓形虫的比较[J].中国人兽共患病杂志,2013,29(5):476-481. |
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| 作者姓名： | 赵东岳 黄翠琴 王琨 温福利 岳良平 王寿昆 林旋 |
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| 作者单位： | 1.福建农林大学动物科学学院,福建省动物药物工程实验室,福州350002;2.龙岩学院生命科学学院,龙岩364012 |
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| 基金项目： | 福建省科技厅省属高校项目(JK2011052)资助 |
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| 摘 要： | 目的 选取弓形虫基因组中高度保守的多拷贝基因529 bp重复序列、ITS-1序列和B1基因作为real-timePCR检测的靶基因,建立检测弓形虫的三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR的检测方法并且与ELISA检测方法进行比较。方法 将529 bp重复序列、B1基因、ITS-1序列的选定扩增序列进行克隆、测序构建标准品;将构建的3个标准品放在一个体系中进行扩增,进行三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR。结果 529 bp、ITS-1和B1的标准曲线的相关系数(R2)均为0.998,并且扩增效率均为96.724%,扩增片段的Tm值分别为 86.5±0.5 ℃ 、78.8±0.5 ℃、83.1±0.5 ℃;构建的三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR特异性试验表明,529 bp、ITS-1和B1有特异性的溶解曲线峰值分别是86.2 ℃、78.9 ℃和83.3 ℃,阴性对照无扩增曲线;敏感性试验表明,529 bp、ITS-1和B1序列最低检出限分别为 173copies/μL、123copies/μL、和135 copies/μL;Tm值的批内、批间重复试验的变异系数均小于0.13%;ELISA检测猪弓形虫IgG抗体的阳性率41.72%,ELISA与荧光定量PCR检测核酸阳性符合率为53.44%(P＜0.01)。结论 建立弓形虫三重SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测技术具有高特异性和敏感性,可为临床弓形虫的诊断提供科学依据
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| 关 键 词： | 三重 RH株弓形虫 溶解曲线 重组质粒 |
| 收稿时间： | 2012-10-27 |
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