CiRS-7/P13K/AKT轴对乳腺癌细胞生物学行为的影响及紫草素干预机制研究

摘 要：［目的］ 探讨小脑变性相关蛋白1反义转录物(cerebellar degeneration-related protein 1 antisense，CDR1as，又名 ciRS-7)调控磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol-3 kinase，P13K）/蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）通路对乳腺癌细胞生物学行为影响及紫草素干预机制。［方法］ 选取河南黄河科技学院附属医院收治的41例乳腺癌患者癌组织及癌旁正常乳腺组织，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测ciRS-7、P13K及AKT 信使RNA（messenger RNA，mRNA）表达情况。选取乳腺癌细胞株MCF-7及正常乳腺细胞MCF-10A进行体外实验。采用RT-PCR法检测MCF-7和MCF-10A细胞ciRS-7、P13K及AKT mRNA表达水平。向MCF-7细胞株转染 ciRS-7抑制剂（转染组） 和ciRS-7 inhibitor 阴性对照（阴性对照组）48 h后，采用Western blot法检测细胞P13K、磷酸化P13K（phosphorylation- phosphatidylinositol-3 kinase，p-P13K）、AKT、磷酸化AKT（phosphorylation- protein kinase B，p-AKT）蛋白表达量，MTT法检测细胞增殖抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell小室体外侵袭和迁徙实验检测细胞的体外迁移及侵袭能力。采用不同浓度（0、4、8、16 μmol/L）紫草素对MCF-7细胞进行干预，48 h后检测细胞增殖抑制率及凋亡率，RT-PCR法检测ciRS-7、P13K及AKT mRNA表达，Western blot法检测细胞P13K、p-P13K、AKT、p-AKT蛋白表达量。［结果］ 相较于癌旁组织和MCF-10A细胞，乳腺癌组织和MCF-7细胞ciRS-7、P13K及AKT mRNA水平更高（P＜0.05）。MCF-7细胞转染后，相较于阴性对照组，转染组P13K、p-P13K、AKT和p-AKT蛋白相对表达量有所降低，且细胞迁徙及侵袭能力均降低；转染48 h后，转染组和阴性对照组增殖抑制率分别为36.71%±4.22%、0.09%±0.05%，两组凋亡率分别为27.84%±3.57%、5.44%±1.28%，差异具有统计学意义（P＜0.05）。随着紫草素干预浓度的增加，48 h细胞增殖抑制率及凋亡率也有所上升，ciRS-7、P13K及AKT mRNA水平以及P13K、p-P13K、AKT、p-AKT蛋白相对表达量有所降低（P＜0.05）。 ［结论］ ciRS-7可通过P13K/AKT通路对乳腺癌细胞生物学行为产生影响，紫草素抑制乳腺癌细胞的增殖，并促进其凋亡，其机制可能与ciRS-7/P13K/AKT通路有关。

Effect of Cirs-7 Regulation of P13K/AKT Pathway on the Biological Behavior of Breast Cancer Cells and the Mechanism of Shikonin Intervention