高效液相色谱法检测精浆辅酶Q10水平及氧化应激研究

目的建立人精浆中辅酶Q10高效液相色谱测定方法,探讨正常生育男性及不育症患者精浆中辅酶Q10含量水平差异及其与男性不育氧化应激反应的关系.方法精浆样品经甲醇沉淀蛋白后,用正己烷提取辅酶Q10组分,45℃下氮气流吹干后溶解,以Lichrospher C18化学键合硅胶为固定相,异丙醇～甲醇～四氢呋喃(55∶ 39∶ 6)为流动相进行色谱等度分离,在275 nm波长下以辅酶Q9为内标定量检测,并对195例不育症患者和23名正常生育对照男性进行分析.结果在所建立的分析条件下,辅酶Q10及内标辅酶Q9色谱保留时间分别约为5.83 min及4.97 min,峰形清晰对称,与样品中其余内源性物质分离完全,定量准确.辅酶Q10浓度在0.01 ～10.00 mg/L范围线性良好.批间(n=5)及平均批内(n=6)测定的相对标准偏差分别为0.80%和1.81%.样品测定回收率为94.1%～99.0%.对23例正常生育男性及195例不育症患者精浆中辅酶Q10含量测定结果分别为(37.1±12.2) μg/L和(48.5±20.4) μg/L,统计学分析表明两组之间的差异有统计学意义(P<0.01),随着精液中精子数量越少,这种差异性越显著.结论精浆CoQ10水平可作为男性不育研究时一项有用的生化参考指标,其升高或降低能反映生殖系统氧化应激反应状况,为临床治疗和有关男性生殖功能机制研究提供参考指导.

Analysis of coenzyme Q10 levels in human seminal plasma by high performance liquid chromatography and study on oxidative stress