胱抑素C在巴斯德毕赤酵母的高效分泌表达及免疫原性分析

目的根据巴斯德毕赤酵母(P.pastoris)密码子的偏好,将人胱抑素C(CysC)基因进行密码子优化,在P.pastoris中表达CysC,并对重组蛋白进行生物学活性评价。方法按照P.pastoris表达系统密码子偏好,优化基因序列,人工合成完整的基因;构建pPIC9k-CysC重组表达质粒,用电穿孔法转化P.pastoris GS115,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,取培养物上清液,经SDS-PAGE电泳和颗粒增强透射免疫比浊法鉴定表达情况。经Western blot和动物实验鉴定重组蛋白的免疫原性。结果表达产物相对分子质量约19 000,优化后的人CysC基因在P.pastoris转化菌得到了高效表达,表达量占分泌总蛋白的80%以上,产物浓度为600～950mg/L。Western blot和动物实验显示重组蛋白具有较好的免疫原性。结论密码子优化后CysC在P.pastoris中获得高效分泌表达,可用于制备抗血清和诊断试剂标准品。