| 一种靶向于生长抑素受体2的药物筛选模型的建立与应用 |
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| 引用本文： | 顾倩倩,刘翠,方伟彬,刘培庆,李民. 一种靶向于生长抑素受体2的药物筛选模型的建立与应用[J]. 中国药理学通报, 2019, 0(11): 1539-1544 |
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| 作者姓名： | 顾倩倩 刘翠 方伟彬 刘培庆 李民 |
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| 作者单位： | 1.中山大学药学院新药成药性评估与评价国家地方联合工程实验室 |
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| 基金项目： | 珠江人才计划本土创新科研团队项目(2017BT01Y093);广东省自然科学基金资助项目(No 2016A030313335) |
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| 摘 要： | 目的 以生长抑素受体2(SSTR2)为靶点,建立生长抑素类似物(SSTA)活性检测的细胞模型,为SSTR2激动剂以及SSTA的药物筛选提供一种简单稳定的评价方法。方法 将SSTR2目的基因整合入pEGFP-N3载体中,构建重组质粒SSTR2-pEGFP-N3,并转染进HEK293细胞,使用G418筛选后挑取阳性克隆,扩大培养获得稳转细胞株。通过荧光细胞成像、免疫蛋白印迹、qPCR等方法对获得的稳转细胞株进行鉴定。建立钙流检测体系,对该体系细胞数量、荧光指示剂浓度、孵育时间等条件进行优化。最后利用建立的筛选模型对不同批次的上市药物生长抑素制剂思他宁进行检测。结果 成功构建SSTR2稳转细胞株,受体主要分布在细胞膜上。确定钙流检测最优条件为:30 000个细胞每孔,Fluo-4/AM指示剂浓度为3 μmol·L -1 ~5 μmol·L -1 ,孵育时间为45 min。在该条件下,不同批次的思他宁EC 50 值稳定。结论 成功构建SSTR2稳转细胞株,并优化钙流检测方法,为生长抑素受体激动剂的筛选提供了一种简单稳定的模型。
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| 关 键 词： | 生长抑素受体2(SSTR2) 筛选模型 钙流检测 EC 50 体系优化 药物评价 |
Establishment and application of a drug screening model targeting somatostatin receptor 2 |
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| GU Qian-qian,LIU Cui,FANG Wei-bin,LIU Pei-qing,LI Min. Establishment and application of a drug screening model targeting somatostatin receptor 2[J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2019, 0(11): 1539-1544 |
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| Authors: | GU Qian-qian LIU Cui FANG Wei-bin LIU Pei-qing LI Min |
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| Affiliation: | (School of Pharmaceutical Sciences, National and Local United Engineering Lab of Druggability andNew Drug Evaluation, Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510006, China) |
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| Abstract: | GU Qian-qian;LIU Cui;FANG Wei-bin;LIU Pei-qing;LI Min(School of Pharmaceutical Sciences, National and Local United Engineering Lab of Druggability andNew Drug Evaluation, Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510006, China) |
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| Keywords: | somatostatin receptor 2 (SSTR2) screening model calcium flow detection EC 50 system optimization drug evaluation |
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