| 人I型丙氨酸氨基转移酶的可溶性表达及抗血清反应模式 |
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| 引用本文： | 谢飞,涂向东,兰风华,朱忠勇.人I型丙氨酸氨基转移酶的可溶性表达及抗血清反应模式[J].中华检验医学杂志,2004,27(12):857-860. |
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| 作者姓名： | 谢飞 涂向东 兰风华 朱忠勇 |
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| 作者单位： | 350025,福州,南京军区福州总医院解放军医学检验中心实验科 |
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| 摘 要： | 目的克隆表达重组人I型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)蛋白及制备抗血清,探讨建立ALT1特异性检测方法思路.方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人ALT1 cDNA,插入pGEX-2T,构建原核表达载体pGEX-2T-ALT1,并转入大肠杆菌进行表达.SDS-PAGE,活力测定和活性染色鉴定表达产物.表达产物免疫小鼠所得抗血清对天然ALT1, 重组ALT1及重组ALT2进行Western blot分析.结果重组质粒测序和酶切结果显示ALT1基因已经成功克隆到pGEX-2T载体.SDS-PAGE和活性染色表明所表达蛋白具有天然活性.抗ALT1血清除识别重组ALT1外,还可识别天然蛋白和重组ALT2. 结论重组人ALT1得到高效可溶性表达.用目前方法制备的抗血清特异性不高,如建立ALT1的免疫学检测方法需要采用特异性识别ALT1的抗体,以避免交叉反应引起的假性升高.
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| 关 键 词： | 丙氨酸氨基转移酶 克隆 分子 |
| 修稿时间： | 2004年5月25日 |
Expression of soluble human alanine transaminase Ⅰ and determination of antiserum reactions to isoenzyme |
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