p38及PI3K在结核杆菌抗原再刺激诱导人γδT细胞凋亡信号转导中的作用

目的：建立结核杆菌抗原（Mtb-Ag）再刺激活化的人γδT细胞凋亡模型；应用信号分子阻断剂观察p38及PI3K信号传导途径在Mtb-Ag再刺激诱导γδT细胞凋亡中的作用。方法：用3种浓度Mtb-Ag分别再刺激培养15～25天的Mtb-Ag激活的人T细胞（MtbAT）24小时后，应用Annexin-V-FITC／PI染色流式细胞术（FCM）检测γδT细胞凋亡；用Mtb-Ag（10．0μg／ml）分别再刺激MtbAT3、6、12和24小时后，观察γδT细胞凋亡情况；预先用SB203580（p38途径抑制剂）及LY294002（PI3K途径抑制剂）分别处理MtbAT60分钟，观察Mtb-Ag（10．0μg／m1）再刺激3小时后γδT细胞凋亡情况。结果：与对照组相比，10．0和20．0μg／ml MtbAg均显著诱导γδT细胞凋亡（P〈0．01），凋亡细胞比例分别增加35．63％及38．83％，且此二种浓度MtbAg在诱导γδT细胞凋亡方面无显著性差异（P〉0．05）；与对照组相比，10．0μg/ml Mtb-Ag再刺激MtbAT3、6、12和24小时均可显著诱导γδT细胞凋亡（P〈0．01），凋亡细胞比例在44．21％～51．76％之间；且Mtb-Ag再刺激MtbAT3小时实验组与再刺激MtbAT 24小时实验组相比，在诱导γδT细胞凋亡方面无显著性差异（P〉0．05），后者的凋亡细胞比例仅比前者增加7．55％；Mtb-Ag再刺激诱导γδT细胞凋亡可被SB203580（80．0μmol／L）及LY294002（10．0μmol／L）抑制，凋亡抑制率分别为91．6％及43．1％。结论：采用Mtb-Ag（10．0μg／m1）再刺激活化的γδT细胞3小时的方法，可建立Mtb-Ag再刺激活化的人γδT细胞凋亡模型；信号分子阻断剂的实验证明，p38途径及PI3K途径均参与了Mtb-Ag再刺激已活化γδT细胞凋亡过程。

Role of p38 and phosphatidylinositol 3 kinase(PI3K) in the signal transduction of apoptosis of activated human γδT cells induced by restimulating with Mycobacterium Tuberculosis antigen