血浆循环MicroRNA提取检测及其在冠心病的差异表达

目的建立血浆循环MicroRNA的提取检测方法,并且检测其在冠心病患者和健康人群之间的差异表达,寻找新的疾病诊断标记物。方法前期入选收取15例冠心病患者和15例健康人的血样标本,性别和年龄在统计学上没有差异,采用Trizol LS提取血浆中的总RNA,Nan-oDrop 1000检测总RNA浓度,设计特异性引物检测hsamiR-16、hsa-miR-126的表达,采用外加cel-miR-39进行校正,分析血浆中循环miRNA的表达差异。结果 (1)血浆提取的总RNA在280nm处有最大吸收峰,260 nm/280 nm比值介于1.67-2.17之间;(2)检测方法的特异性和灵敏度较好,cDNA梯度稀释20倍可以分辨出来,用hsa-miR-16 mimics的检测累加特异性,其CT值成梯度的累加,特异性较好;(3)检测hsa-miR-126在冠心病患者和健康人的表达有统计学差异(P<0.001),hsa-miR-16在两组间的表达没有统计学差异(P=0.306)。结论采用Trizol LS提取血浆总RNA的方法可行,茎环实时定量荧光检测miRNAs的方法特异性和灵敏性较好,血浆hsa-miR-126表达的差异可能在冠心病的发展过程中发挥调节作用,其具体的机制还有待于进一步的研究。