单纯疱疹病毒Ⅰ形胸苷激酶基因在大肠杆菌中的融合表达

用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切已构建的含单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV-1TK)基因的pUC18/TK质粒，将切出的TK基因片段克隆入原核表达载体pWR450-1中，构建成HSV-1TK基因重组表达质粒pWR450-1/TK。以HSV-1TK特异性引物TK1For和TK2Rev进行PCR鉴定可扩增出预期的503bp的TK基因编码区部分序列；EcoRⅠ和HindⅢ双酶切质粒pWR450-1/TK，可切出约1150bp的DNA片段，表明重组质粒中已插入HSV-1TK基因片段。用IPTG诱导pWR450-1/TK/JM109，表达出相对分子质量（Mr）约为97000的TK和β-半乳糖苷酶(Mr55000)融合蛋白。薄层扫描显示，该融合蛋白含量占菌体蛋白总量的27.47％。