重组大鼠质粒pEGFP—GDNF的构建和脊髓内表达的实验研究

采用RT－PCR方法从大鼠胎脑组织总RNA中扩增出该基因的全序列cDNA，并以融合蛋白方式克隆到增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的真核表达载体中，成功构建了重组质粒pEGFP-GDNF在体表达载体。采用基因注射法将阳离子脂质体DC－Chol和pEGFP-GDNF基因混合后转染至大鼠胸段脊髓组织中，观察GDNF在大鼠脊髓中的表达。RT－PCR结果表明注射局部GDNF mRNA表达增加。荧光显微镜下观察发现，注射局部灰质和白质神经细胞内均有较多绿色荧光蛋白表达。本研究结果提示，阳离子脂质体介导GDNF体内转基因的方法是可行的，EGFP可作为报告基因观察GDNF在体内的表达。