摘 要: | 目的:探索姜黄素(CUR)联合声光动力疗法(SPDT)对人肝癌Hep G2细胞的杀伤作用及其作用机制,为临床应用CUR联合声光动力治疗肝癌提供依据。方法:实验对象人肝癌Hep G2细胞,分为PDT组、SDT组和SPDT组三组,采用CCK-8检测细胞生存率;荧光分光光度计检测胞内DCFH-DA的荧光强度反应各组细胞活性氧产生情况、胞内JC-1荧光探针的红、绿荧光强度反应各组细胞线粒体膜电位变化情况;Western blot检测凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3、Bcl-2、Bcl-x L、Bax在各组细胞中的表达情况。结果:应用CCK-8实验发现当CUR浓度为80μmol/L时,肝癌Hep G2细胞生存率显著下降;但40μmol/L的CUR作用的Hep G2细胞生存率90%。激光共聚焦显微镜及荧光分光光度计检测发现40μmol/L的CUR孵育Hep G2细胞3 h,细胞摄取CUR的量达到峰值。当光照波长445 nm,能量密度5 J/cm2时,光动力(PDT)组细胞生存率下降至(71.9±7.2)%。声动力(SDT)超声作用时间为10 min时,细胞的生存率下降至(70.6±6.8)%。SPDT组先超声作用10 min,然后激光照射(能量密度5 J/cm2),20 h后细胞生存率下降至(54.6±3.8)%。流式细胞术显示细胞凋亡率分别为PDT组(12.2±1.8)%,SDT组(11.9±1.3)%,SPDT组(19.3±1.6)%。透射电镜发现SPDT组有大量凋亡细胞。与PDT和SDT组相比,SPDT组细胞活性氧产量明显增高,线粒体膜电位下降明显,凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3、Bax的表达增加,Bcl-2、Bcl-x L的表达减少。结论:CUR联合SPDT较单独治疗取得了更为显著的治疗效果,达到了强强联合,优势互补的预期疗效。作用机制可能是CUR联合SPDT后产生较多的活性氧,损伤线粒体膜,导致线粒体膜电位及结构发生改变,膜通透性增大,通过细胞色素C的入胞诱发凋亡相关通路。
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