| 摘 要： | 目的构建转谷氨酰胺酶(microbial transglutaminase,mTG)交联明胶水凝胶的脂肪干细胞(adiposederived stem cells,ADSCs)三维培养体系,观察ADSCs在该水凝胶中生长情况。方法取SD大鼠腹股沟皮下脂肪组织,采用胶原酶消化及离心分离获取ADSCs,并培养传代。定量称取明胶及mTG,分别置于PBS中溶解后,按照一定比例混匀制备mTG交联明胶水凝胶。取P3~P4代ADSCs分别于水凝胶表面二维培养及包埋于水凝胶中进行三维培养。培养期间,采用倒置相差显微镜观察ADSCs的生长形态,并进行HE染色和Masson染色,观察细胞在材料中的分布形态;采用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察ADSCs在材料中存活状况;扫描电镜观察ADSCs在水凝胶表面黏附性;采用Alamar-Blue法检测ADSCs在水凝胶中增殖情况,以培养皿中常规培养细胞作为对照。结果二维培养观察示,ADSCs在水凝胶表面生长良好、细胞功能正常,贴壁良好。三维培养观察示,ADSCs在mTG交联明胶水凝胶中生长良好,呈三维立体形态,细胞向各方向伸展;细胞死活染色显示凋亡细胞非常少。各时间点三维培养的细胞数量显著低于常规培养细胞,比较差异有统计学意义(P0.05);但第8天开始,三维培养的细胞增殖明显加快,但常规培养细胞增殖开始减慢。结论基于mTG交联明胶水凝胶三维培养的ADSCs黏附性强,生长状况良好,成活率高。
|
