小檗碱对U251胶质瘤干细胞的诱导分化作用

目的研究小檗碱对胶质瘤干细胞(GSC)分化的影响。方法用CD133免疫磁珠法由U251胶质瘤细胞中分选培养GSC,并用流式细胞术进行验证;细胞毒性实验评价小檗碱对GSC生长的抑制作用,采用不同浓度小檗碱(0.001、0.01、0.1、1μmol/L)作用于GSC,测量其吸光度值(OD);用RT-PCR、免疫荧光法检测干细胞标记物CD133、Nestin及细胞分化标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白2(MAP2)的表达水平。结果免疫磁珠法分选后CD133+细胞比例超过98%,无血清培养条件下能形成干细胞球。细胞毒性实验显示:小檗碱对GSC生长的抑制作用随剂量和时间的增加而增强。RT-PCR检测显示:随时间延长,小檗碱可使干细胞标记物CD133、Nestin基因的mRNA表达水平逐步降低,而细胞分化标记物GFAP、MAP2基因的mRNA表达水平逐渐升高。免疫荧光法检测显示:小檗碱能抑制CD133、Nestin蛋白的表达,上调GFAP、MAP2蛋白的表达。结论小檗碱能有效抑制GSC生长,并诱导其分化。