| 摘 要： | 目的探讨人参皂苷Rg 1在新生鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxia ischemia brain damage,HIBD)中的抗凋亡作用,分析可能的信号通路机制。方法 10日龄SPF级SD大鼠48只,体质量17~21 g,随机分为4组(n=12),假手术组、模型组(HI组)、模型+人参皂甙Rg 1组(HI+Rg 1组)、模型+人参皂甙Rg 1+U 0126干预组(HI+Rg 1+U 0126组)。HI组、HI+Rg 1组及HI+Rg 1+U 0126组大鼠采用结扎单侧颈总动脉并低氧通气方法制备HIBD模型;假手术组仅分离右侧颈总动脉。HI+Rg 1+U 0126组于造模前1 h右侧脑室注射5μL含U 0126(25μg/kg)的PBS,其余3组同法注射5μL PBS。HI+Rg 1组及HI+Rg 1+U 0126组于术后即刻腹腔内注射0.1 m L含Rg 1(40 mg/kg)的生理盐水;HI组和假手术组注射0.1 m L生理盐水。术后4、24 h处死各组大鼠,取右侧半球皮层和海马脑组织,采用Western blot及免疫组织化学染色检测胞外信号相关蛋白激酶1/2(extracellular signalrelated protein kinase 1/2,Erk 1/2)及磷酸化Erk 1/2(phospho-Erk 1/2,p-Erk 1/2)、缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)和活化的半胱天冬氨酸酶3(cleaved Caspase-3,CC 3)蛋白表达;TUNEL法检测原位神经元凋亡情况。结果 Western blot检测示,各时间点各组均有Erk 1/2、p-Erk 1/2、HIF-1α、CC 3蛋白表达;术后4、24 h,HI组HIF-1α、CC 3蛋白表达均较假手术组明显增加(P0.05);术后4 h,HI组p-Erk 1/2蛋白表达较假手术组明显增加(P0.05);术后4、24 h,HI+Rg 1组p-Erk 1/2及HIF-1α蛋白表达较HI组明显上调(P0.05),CC 3蛋白表达则明显下调(P0.05);术后4、24 h,HI+Rg 1+U 0126组p-Erk 1/2及HIF-1α蛋白表达较HI+Rg 1组明显下调(P0.05),CC 3蛋白表达则明显上调(P0.05)。各时间点各组间Erk 1/2蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P0.05)。免疫组织化学染色可见HIF-1α蛋白、CC 3蛋白定位主要集中在细胞核及细胞质,Erk 1/2、p-Erk 1/2蛋白定位主要集中在细胞质,蛋白表达强度与Western blot结果一致。TUNEL染色示术后4、24 h,HI组神经元凋亡指数较假手术组明显上升(P0.05);术后24 h,HI+Rg 1组神经元凋亡指数较HI组及HI+Rg 1+U 0126组明显降低(P0.05)。结论Rg 1通过Erk 1/2信号通路增强并稳定HIBD诱导的HIF-1α表达,从而抑制Caspase-3活化,减轻新生鼠HIBD后神经元凋亡。
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