华支睾吸虫蛋白酶体α2新基因的生物信息学分析与克隆表达 |
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引用本文: | 杨光,周天鸿,李月琴,荆春霞,胡旭初,余新炳.华支睾吸虫蛋白酶体α2新基因的生物信息学分析与克隆表达[J].中国人兽共患病杂志,2009,25(9):865-869. |
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作者姓名: | 杨光 周天鸿 李月琴 荆春霞 胡旭初 余新炳 |
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作者单位: | 暨南大学医学院;暨南大学生命科学技术学院;中山大学基础医学院; |
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基金项目: | 广东省自然科学基金团队项目资助 |
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摘 要: | 目的发现华支睾吸虫成虫蛋白酶体新基因,应用生物信息学方法预测其结构和功能,表达重组蛋白为进一步确定其功能特征奠定基础。方法通过华支睾吸虫成虫cDNA文库的大规模测序,获取全长cDNA序列,利用生物信息学软件ORFfinder,BLAST,Conserved Domains和ExPASy等识别华支睾吸虫蛋白酶体α2(CsPSMA2)新基因,分析其基因和编码蛋白结构,同源性比对并构建系统发育树。将CsPSMA2基因克隆到pGEX-4T-1原核表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定。结果确定了编码CsPSMA2的新基因并成功登录到GenBank(Accession NO.:EU223819)。该基因全长833bp,编码235个氨基酸,第5-232aa之间含有蛋白酶体α2全长结构域,理论分子量为26.0kDa,分子进化分析显示CsPSMA2的蛋白与日本血吸虫亲缘关系最近,重组质粒融合表达了带有GST标签的CsPSMA2蛋白。结论发现了华支睾吸虫蛋白酶体α2新基因,确定了其重要的功能域和结构特征,成功进行了该基因在大肠杆菌中的克隆表达。
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关 键 词: | 华支睾吸虫 蛋白酶体α2 生物信息学 克隆 表达 |
收稿时间: | 2009-09-20 |
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