人肺腺癌TLE1 N端Q结构域片段在原核系统表达纯化及其多克隆抗体的制备

背景与目的 TLEI是参与Wnt、Notch以及EGFR信号通路调控的一种重要蛋白.TLE1 N端Q结构域片段通过介导自身寡聚化及与LEFl结合发挥调控作用.本实验旨在构建人TLE1 N端Q区基因在大肠杆菌的融合表达载体,制备并纯化人TLEI N端Q结构域蛋白片段,制备TLEl Q结构域多克隆抗体.方法 以人肺腺癌cDNA库为模板聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)特异性扩增TLE1-Q(1-136)基因序列,与pGEX-4T-1质粒连接后转化感受态大肠杆菌E.coli.以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D thiogalactoside,IPTG)诱导表达产生融合蛋白GST-TLEI-Q(1-136).经亲和层析,Thrombin酶切,FPLC纯化,SDS-PAGE鉴定目的蛋白TLE1-Q(1-136).免疫家兔,制备多克隆抗体.结果 测序证实重组表达质粒中的人TLE1 N端Q结构域基因序列正确,成功构建表达型重组质粒pGEX-4T1-TLE1-Q重组质粒转化大肠杆菌c+后,经诱导,重组蛋白GST-TLE1-021-136)得到表达.SDS-PAGE鉴定示纯化蛋白为目的蛋白人TLEl N端Q结构域片段TLE1-Q(1-136).免疫家兔后收获抗血清,ELISA显示抗体效价为1:20000,具有高度特异性.免疫印迹结果显示,制备的多抗可与TLEI.021.136)蛋白特异性结合.结论 成功构建了人TLE1 N端Q结构域重组融合蛋白表达质粒pGEX-4T1-TLE1-Q表达纯化了稳定可溶TLE1 N端Q结构域蛋白TLE1-Q(1-136),制备了人TLE1 N端Q结构域蛋白片段多克隆抗体,为进一步研究TLE1在肺癌生成中的作用奠定了基础.

Prokaryotic expression and purification of human TLE1 N-terminal Q domain fragment and production of its polyclonal antibody