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| 人纤溶酶原K5突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化 | |
| 引用本文： | 蔡卫斌,李朝阳,杨中汉,骆晓枫,周世豪,李民友,刘祖国,高国全.人纤溶酶原K5突变体Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化[J].中山大学学报(医学科学版),2004,25(3):241-244. |
| 作者姓名： | 蔡卫斌 李朝阳 杨中汉 骆晓枫 周世豪 李民友 刘祖国 高国全 |
| 作者单位： | 1. 中山大学,基础医学院生化教研室,广东,广州,510080 2. 中山大学,中山眼科中心,广东,广州,510080 3. 广州市启源生物科技有限公司,广东,广州,510630 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，美国中华医学会资助项目，教育部留学回国人员科研启动基金，广东省医药卫生科研项目，广东省广州市科技攻关项目 |
| 摘 要： | 目的]构建人纤溶酶原Kringle 5(K5)的突变体Cys461-Cys540(K5 mut1),在大肠杆菌中表达,亲和层析纯化,为探讨K5抗血管增生活性与Kringle结构域的关系提供基础.方法]以K5全长cDNA为模板用PCR的方法扩增人纤溶酶原K5mutl基因,将其克隆进表达载体pET-22b( )中,并用限制性核酸内切酶酶切和DNA测序鉴定其连接正确;pET-22b( )/K5 mut1转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物用固化Ni2 -His Bind Resin亲和层析方法纯化,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot方法分析鉴定.结果]PCR扩增获得258 bp的人纤溶酶原K5 mutl基因片段,正确插入pET-22 b( )载体,在大肠杆菌中该基因编码蛋白的表达量占菌体总蛋白13%左右;SDS-PAGE显示其相对分子质量M1≈14.1×103,Western blot证实该表达蛋白为K5 mut1重组蛋白,经亲和层析后K5 mut1重组蛋白纯度大于90%,获得率约为10 mg/L.结论]成功构建人纤溶酶原K5 mut1,实现在大肠杆菌中高效表达,亲和层析纯化获得较高纯度K5 mut1重组蛋白. |
| 关 键 词： | 纤溶酶原 突变型K 5 血管增生抑制因子 突变 基因表达 |
| 文章编号： | 1672-3554(2004)03-0241-04 |
| 修稿时间： | 2003年12月8日 |
Construction,Expression and Purification of Human Plasminogen Kringle 5 Mutant Ⅰ in E.coli |
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| CAI Wei-bin ,LI Chao-yang ,YANG Zhong-han ,LUO Xiao-feng ,ZHOU Shi-hao ,LI Min-you ,LIU Zu-guo ,GAO Guo-quan.Construction,Expression and Purification of Human Plasminogen Kringle 5 Mutant Ⅰ in E.coli[J].Journal of Sun Yatsen University(Medical Sciences),2004,25(3):241-244. | |
| Authors: | CAI Wei-bin LI Chao-yang YANG Zhong-han LUO Xiao-feng ZHOU Shi-hao LI Min-you LIU Zu-guo GAO Guo-quan |
| Institution: | CAI Wei-bin 1,LI Chao-yang 2,YANG Zhong-han 1,LUO Xiao-feng 1,ZHOU Shi-hao 1,LI Min-you 3,LIU Zu-guo 2,GAO Guo-quan 1 |
| Abstract: | |
| Keywords: | plasminogen kringle 5 angiogenic inhibitor mutation gene expression |
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