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| 抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体噬菌体单链抗体库的构建与初步筛选 | |
| 引用本文： | 韩东刚,段小艺,郭佑民,周琦,王全颖,杨广笑.抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体噬菌体单链抗体库的构建与初步筛选[J].南方医科大学学报,2010,30(1):25. |
| 作者姓名： | 韩东刚 段小艺 郭佑民 周琦 王全颖 杨广笑 |
| 作者单位： | 1. 西安交通大学医学院第二附属医院,超声研究室,陕西西安710004 2. 西安交通大学医学院第一附属医院核医学科,陕西西安,710061 3. 西安交通大学医学院第二附属医院,影像中心,陕西西安710004 4. 西安华广生物工程公司,陕西西安,710025 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(30600744);;陕西省科技攻关项目(2007K11-02) |
| 摘 要： | 目的构建抗表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)特异性单链抗体库,从中筛选抗EGFRvⅢ特异性单链抗体。方法用pep-3偶联载体蛋白OVA,然后免疫BALB/c小鼠从脾淋巴细胞中提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增重链(VH)和轻链(VL)的可变区基因片段。将两基因片段由编码(Gly4Ser)3的linker连在一起,并克隆入噬菌体展示表达载体pCANTAB5E中,电转化至E.coliTG1,经辅助噬菌体超感染,构建噬菌体单链抗体库。以pep-3-BSA为抗原对所建抗体库进行4轮亲和筛选,用ELISA鉴定抗体与EGFRvⅢ结合的特异性。结果经琼脂糖凝胶电泳分析,RT-PCR方法扩增的抗体VH和VL基因片段大小约350和320bp,与预期理论值相符。经重组PCR得到大小约780bp的ScFv基因片段。ScFv基因片段经双酶切后成功定向克隆到噬菌粒载体,回收后构建成库容量为5.0×106的噬菌体抗体库,噬菌体滴度为3.0×104pfu/ml。通过亲和筛选使抗EGFRvⅢ噬菌体单链抗体得到富集,第4轮为第1轮的56倍。在E.coliHB2151中实现了单链抗体的可溶性表达。SDS-PAGE结果显示抗体相对分子... |
| 关 键 词： | 噬菌体展示技术 单链抗体 表皮生长因子受体Ⅲ型突变体 筛选 |
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