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| NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定 | |
| 引用本文： | 李辉,龚燕华,胡光宇,阴彬.NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的构建与鉴定[J].山西医科大学学报,2010,41(9). |
| 作者姓名： | 李辉 龚燕华 胡光宇 阴彬 |
| 作者单位： | 1. 武警医学院组织胚胎学教研室,天津,300162 2. 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室;武警医学院生物化学教研室 3. 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目，医学分子生物学国家重点实验室开放课题 |
| 摘 要： | 目的 构建并鉴定NSPc1-shRNA慢病毒表达载体,以便应用RNAi技术以及慢病毒感染系统进一步研究NSPc1的功能.方法 设计针对NSPc1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的pLentiLox3.7载体片段进行连接、转化.用双酶切及DNA测序鉴定重组克隆.提取阳性克隆质粒并转染293T细胞,收集细胞全蛋白用Western检测RNAi效果.结果 重组克隆经酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,Western检测证实设计的三条RNA干扰序列有效敲低了293T细胞中的内源性NSPc1.结论 3个NSPc1-shRNA慢病毒表达载体的成功构建为应用基于慢病毒系统的RNAi技术来研究NSPc1基因的功能打下了基础. |
| 关 键 词： | RNA 干扰 小发夹状 RNA 慢病毒载体 多梳家族 |
Construction and identification of lentiviral vectors expressing shRNA of NSPc1 gene |
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| LI Hui,GONG Yan-hua,HU Guang-yu,YIN Bin.Construction and identification of lentiviral vectors expressing shRNA of NSPc1 gene[J].Journal of Shanxi Medical University,2010,41(9). | |
| Authors: | LI Hui GONG Yan-hua HU Guang-yu YIN Bin |
| Abstract: | |
| Keywords: | NSPc1 |
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