| 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因重组真核表达载体的构建及在烫伤大鼠皮肤组织中的表达 |
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| 引用本文： | 杨磊,高建华,王甲汉.单纯疱疹病毒胸苷激酶基因重组真核表达载体的构建及在烫伤大鼠皮肤组织中的表达[J].中国临床康复,2006,10(12):95-97,i0003. |
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| 作者姓名： | 杨磊 高建华 王甲汉 |
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| 作者单位： | 南方医科大学南方医院烧伤整形中心,广东省广州市510515 |
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| 基金项目： | 广东省自然科学基金课题（032906）;广东省医药科研基金课题（A2002389）. |
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| 摘 要： | 目的：构建单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV—tk）基因重组真核表达载体pcDNA3．1／HSV—tk，并观察其在烫伤大鼠皮肤中的表达。方法：实验于2003～07／12在解放军第一军医大学热带卫生学系实验室进行。在原核表达质粒pUChHyTk基础上，利用分子克隆技术，构建重组真核表达质粒pcDNA3．1／HSV—tk。取20只Wistar大鼠，全麻后背部浸入95℃水浴锅中，烫伤12s，造成30％Ⅲ度烫伤，烫伤后随机分为两组（n=10）：①pcDNA3．1／tk组：烫伤后当天及第1，2，3，4周后于大鼠左后背部创面边缘（距创面边缘0．5cm）皮下注射脂质体和重组质粒的混合物192μL3．6μg pcDNA3．1／tk（2μL）＋10μL脂质体＋180μL生理盐水】。②pcDNA3．1组：注射时间和方法同前，脂质体和质粒混合物为3．0μg pcDNA3．1（2μL）＋10μL脂质体＋180μL生理盐水。伤后5周断头处死大鼠，取注射点附近皮肤，用反转录-聚合酶链反应法检测HSV—tk基因的表达。结果：20只大鼠全部进入结果分析。大鼠重组质粒经酶切鉴定与预期结果一致，DNA测序结果表明tk基因已正确插入到pcDNA3．1质粒，说明了重组真核表达载体pcDNA3.1／HSV—tk已成功构建。反转录-聚合酶链反应结果显示脂质体介导的HSV—tk基因转移可在创面成纤维细胞中出现阳性表达。结论：应用分子克隆技术成功地构建了重组真核表达载体pcDNA3．1／HSV—tk，并在烫伤大鼠皮肤中得到了阳性表达。
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| 关 键 词： | 基因疗法 成纤维细胞 烧伤 胸苷激酶 |
| 文章编号： | 1671-5926（2006）12-0095-03 |
| 收稿时间： | 07 29 2005 12:00AM |
| 修稿时间： | 2005-07-292005-12-24 |
Construction of eukaryotic recombinant plasmid of herpes simplex virus thymidine kinase gene and its expression in skin tissue of scald rats |
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| Yang Lei, Coo Jian-hua, Wang Jia-han.Construction of eukaryotic recombinant plasmid of herpes simplex virus thymidine kinase gene and its expression in skin tissue of scald rats[J].Chinese Journal of Clinical Rehabilitation,2006,10(12):95-97,i0003. |
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| Authors: | Yang Lei Coo Jian-hua Wang Jia-han |
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| Institution: | Center of Bum and Plastic Surgery, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, Guangdong Province, China |
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