| 摘 要： | 目的乙型肝炎病毒X(hepatitis B virus X protein,HBx)蛋白通过调控蛋白编码基因表达而广泛参与人原发性肝细胞癌(简称肝癌)的发生和进展。本研究将HBx的调控功能拓展到非编码RNA领域,探讨HBx能否调控宿主肝癌细胞内microRNA(miRNA)的表达,进而参与肝癌细胞生长及恶性转化。方法利用高通量芯片分析及实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,q RT-PCR)鉴定HBx在肝癌细胞内诱发的miRNA表达变化。通过系列蛋白和mRNA表达分析,细胞周期及凋亡实验以及萤光素酶报告实验来检测miR-16家族表达抑制后HepG2肝癌细胞的生物学变化。结果芯片分析结果显示,HBx在HepG2细胞内诱发了大量的miRNAs表达变化,其中miR-16家族的低表达能在HepG2、SK-HEP-1及Huh7肝癌细胞中得到重复。同时,HBx显著上调miR-16家族的靶基因CCND1的表达。c-myc介导了HBx相关miR-16家族沉默,外源表达的miR-16/15a能通过阻滞细胞周期进展和诱导凋亡而抑制HepG2-hbx(稳定表达HBx)细胞的增殖、克隆形成及非贴壁生长能力。反之,沉默miR-16表达能促进HepG2细胞的周期进展和生长。结论 HBx能在体外改变肝癌细胞的miRNA表达谱,尤其是沉默miR-16家族表达。c-myc高表达介导了HBx下调miR-15a/16的过程且是HBx促进HepG2细胞恶性转化所必须的。因此,miR-16家族可能成为HBV相关肝细胞癌的治疗靶点。
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