采用荧光定量RT-PCR法检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道 |
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引用本文: | 黄维清,孔庆暖,张亚青,张七一. 采用荧光定量RT-PCR法检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道[J]. 心脏杂志, 2009, 21(4): 457-461 |
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作者姓名: | 黄维清 孔庆暖 张亚青 张七一 |
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作者单位: | 青岛市市立医院:1.病理科,3.心内科,山东 青岛 266071;2.第四军医大学西京医院病理科,陕西 西安 710032 |
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基金项目: | 青岛市科技发展计划立项项目资助 |
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摘 要: | 目的 建立用SYBR Green荧光染料检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN4)的实时定量RT-PCR方法。方法 提取窦房结细胞的总RNA,反转录成cDNA后,应用RT-PCR法检测HCN4的表达,通过琼脂糖凝胶回收PCR产物并构建重组质粒,用梯度稀释的质粒模板建立荧光定量RT-PCR法检测HCN4的标准曲线,并检测心脏组织中HCN4的表达水平。结果 成功构建了质粒重组子,并建立用SYBR Green荧光染料在RNA水平检测HCN4通道的标准曲线,相关系数为0.997重复6次实验组内和组间变异系数均<1.0%。心脏组织中窦房结HCN4表达量最高,心室表达量最低。结论 基于SYBR Green荧光染料建立的定量RT-PCR体系敏感性高,线性范围广,重复性好,可快速准确地检测HCN4的表达。
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关 键 词: | 聚合酶链反应 荧光定量 HCN基因 心脏 |
Qualification of hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel mRNA using the fluorogenic quantitative RT-PCR method |
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Abstract: | |
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Keywords: | |
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