| 采用荧光定量RT-PCR法检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道 |
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| 引用本文： | 黄维清,孔庆暖,张亚青,张七一.采用荧光定量RT-PCR法检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道[J].心脏杂志,2009,21(4):457-461. |
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| 作者姓名： | 黄维清 孔庆暖 张亚青 张七一 |
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| 作者单位： | 青岛市市立医院:1.病理科，3.心内科，山东 青岛 266071；
2.第四军医大学西京医院病理科，陕西 西安 710032 |
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| 基金项目： | 青岛市科技发展计划立项项目资助 |
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| 摘 要： | 目的 建立用SYBR Green荧光染料检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道（HCN4）的实时定量RT-PCR方法。方法 提取窦房结细胞的总RNA，反转录成cDNA后，应用RT-PCR法检测HCN4的表达，通过琼脂糖凝胶回收PCR产物并构建重组质粒，用梯度稀释的质粒模板建立荧光定量RT-PCR法检测HCN4的标准曲线，并检测心脏组织中HCN4的表达水平。结果 成功构建了质粒重组子，并建立用SYBR Green荧光染料在RNA水平检测HCN4通道的标准曲线，相关系数为0.997重复6次实验组内和组间变异系数均<1.0％。心脏组织中窦房结HCN4表达量最高，心室表达量最低。结论 基于SYBR Green荧光染料建立的定量RT-PCR体系敏感性高，线性范围广，重复性好，可快速准确地检测HCN4的表达。
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| 关 键 词： | 聚合酶链反应 荧光定量 HCN基因 心脏 |
Qualification of hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel mRNA using the fluorogenic quantitative RT-PCR method |
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