| 人肌细胞增强因子2C基因慢病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 孙兆刚,付鹏,刘爱华,王静波,孙新六,刘兴田. 人肌细胞增强因子2C基因慢病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达[J]. 中华临床医师杂志(电子版), 2012, 6(20): 6306-6309 |
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| 作者姓名： | 孙兆刚 付鹏 刘爱华 王静波 孙新六 刘兴田 |
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| 作者单位： | 泰安市中心医院血液科 |
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| 基金项目： | 山东省自然科学基金(ZR2009CM132) |
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| 摘 要： | 目的构建人肌细胞增强因子2C(MEF2C)慢病毒表达载体并检测其表达性能,以便应用过表达技术进一步研究MEF2C的功能。方法以人MEF2C基因序列为模板合成其编码框序列,通过限制性内切酶NotⅠ和NsiⅠ酶切、T4DNA连接酶连接,将MEF2C插入慢病毒载体质粒LV5-GFP,构建人MEF2C基因重组慢病毒质粒载体,转化感受态细菌,筛选阳性克隆,与包装质粒通过脂质体共转染人胚肾细胞系293T,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。病毒感染293T细胞,荧光显微镜下观察感染效率,PCR方法检测MEF2C mRNA的过表达情况。结果成功构建慢病毒表达载体LV5-MEF2C-GFP,三质粒共转染293T细胞后形成假慢病毒颗粒;浓缩假病毒后测定其滴度为2×109TU/ml;以复感染系数MOI为5感染293T细胞,感染效率在70%以上。PCR证实感染带有目的基因假病毒的293T细胞表达MEF2CmRNA的水平较感染阴性对照病毒的293T细胞表达水平明显升高(t=11.93,P=0.000)。结论成功构建MEF2C慢病毒表达系统,为应用过表达技术探索其在肿瘤发生和发展中的作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 慢病毒属 绿色荧光蛋白质类 MEF2C 293T细胞 |
Construction of a lentiviral vector containing human MEF2C gene and its expression in 293T cells |
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| SUN Zhao-gang,FU Peng,LIU Ai-hua,WANG Jing-bo,SUN Xin-liu,LIU Xing-tian. Construction of a lentiviral vector containing human MEF2C gene and its expression in 293T cells[J]. Chinese Journal of Clinicians(Electronic Version), 2012, 6(20): 6306-6309 |
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| Authors: | SUN Zhao-gang FU Peng LIU Ai-hua WANG Jing-bo SUN Xin-liu LIU Xing-tian |
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| Affiliation: | .Department of Hematology,Taian Central Hospital,Taian 271000,China |
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