肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对骨髓基质细胞的毒性作用

背景：已证实肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL）能选择性诱导白血病细胞凋亡，并且不影响正常造血干/祖细胞的功能。但TRAIL对作为造血微环境核心的骨髓基质细胞的毒性作用如何，据作者查新检索目前尚未见系统报道。 目的：通过观察TRAIL对骨髓基质细胞的凋亡诱导效应及其造血支持功能的影响，继而评价TRAIL对骨髓基质细胞的毒性作用。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察，于2006-03/10在解放军沈阳军区总医院中心实验室完成。 材料：血常规、骨髓涂片细胞检查正常的骨髓标本11份，取自解放军沈阳军区总医院血液科。化疗药物柔红霉素为浙江海正药业股份有限公司产品，国药准字H33020925。 方法：Percoll+贴壁法体外分离培养骨髓基质细胞，达80%融合时胰蛋白酶消化扩增，取处于对数生长期的细胞，分为4组，空白对照组不进行任何干预，柔红霉素组加入0.5 μmol/L柔红霉素作用24 h，TRAIL组加入200 μg/L TRAIL作用18 h，联合组加入0.5 μmoL/L柔红霉素作用6 h后再以200 μg/L TRAIL作用18 h。取第2代骨髓基质细胞，60Co射线照射消除内源性造血集落，接种后去除悬浮细胞，TRAIL组以200 μg/L TRAIL作用基质细胞层18 h，按1×105/孔将骨髓单个核细胞接种于基质细胞层，扩增5 d后加入甲基纤维素培养体系，于37 ℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度条件下培养10 d。 主要观察指标：荧光显微镜观察诱骗受体在骨髓基质细胞的表达及定位，流式细胞仪检测柔红霉素对骨髓基质细胞诱骗受体表达的影响，AnnexinⅤ/PI标记TRAIL对骨髓基质细胞的凋亡诱导作用及对其造血支持功能的影响。 结果：诱骗受体DcR1和DcR2在骨髓基质细胞中均有表达，主要定位于胞膜及胞浆。0.5 μmol/L柔红霉素作用24 h后，基本不影响诱骗受体DcR1和DcR2的表达水平。与空白对照组细胞凋亡率比较，TRAIL组无明显变化（t=0.973，P > 0.05）；柔红霉素组、联合组均显著升高（t=5.141，P=0.001；t=4.187，P=0.002），此两组间比较差异无显著性意义（t=1.222，P > 0.05）。与空白对照组比较，TRAIL组骨髓单个核细胞数、粒-巨噬集落形成单位均无明显变化（t=1.313，P > 0.05；t=1.172，P > 0.05） 结论：TRAIL的诱骗受体DcR1及DcR2在骨髓基质细胞均有表达，使骨髓基质细胞免于TRAIL的凋亡诱导效应，且TRAIL不增强柔红霉素对骨髓基质细胞的细胞毒性作用。

Toxic effects of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand on bone marrow stromal cells