| 应用外部引导序列切割人巨细胞病毒UL148 RNA的研究CSCD |
| |
| 作者姓名： | 胡兢晶王波苏海浩丁俊彩郭媛媛谢斌华伍苑宾蔡丽君郭梦杰 |
| |
| 作者单位： | 1.广东省妇幼保健院儿科511442; |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金（81070516）；广东省自然科学基金（2015A030313726,9151008901000085）；广东省医学科研基金（A2015133,A2009078） |
| |
| 摘 要： | 目的 研究人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus,HCMV）临床病毒株UL/b＆#39;区域UL148基因功能及抗HCMV治疗新策略,应用DNA性质外部引导序列（External guide sequences,EGS）在体外抑制UL148 RNA的表达.方法 应用RNA structure生物软件模拟UL148 RNA二级结构,选择二级结构相对简单的区域设计EGS,并合成EGS核苷酸序列.应用PCR方法分别扩增UL148及M1RNA基因,克隆至T7启动子下游,在T7 RNA聚合酶的作用下,体外转录UL148 RNA及M1RNA,其中UL148以32p标记并进行体外转录.混合EGS、M1RNA及UL148 RNA于切割反应液中,反应1h后,进行尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,Typhoon扫描仪观察结果.结果 根据UL148 RNA二级结构选取第58 ～72位碱基作为EGS结合区域,其切割位点位于57位,针对此区域设计EGS57,并在体外进行EGS57与UL148 RNA结合的二级结构的模拟,可形成M1RNA天然作用底物类似的茎环结构.在T7 RNA聚合酶的作用下,分别在体外转录M1RNA及UL148 RNA,其大小均与预期相符.经切割反应,可获得与预期切割位点相符的切割条带.结论 EGS57可切割UL148RNA,其切割位点准确,与预期相符.该研究为进一步探讨UL148基因功能提供有效基因沉默工具.
|
| 关 键 词： | 人巨细胞病毒 外部引导序列 UL148 临床病毒株 |
| 本文献已被 维普 等数据库收录！ |
|
