| 人白细胞介素—15cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 沈永泉,崔莲仙.人白细胞介素—15cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J].基础医学与临床,1997,17(5):29-32,28. |
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| 作者姓名： | 沈永泉 崔莲仙 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室 |
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| 基金项目： | 863青年科学基金,国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 从正常人外周血中分离粘附的单核细胞，加入ＬＰＳ刺激４ｈ后提取细胞ｍＲＮＡ反转录获得ｃＤＮＡ第一链，用两对特异引物进行巢式ＰＣＲ扩增出含ＢａｍＨＩ酶切位点的编码人１Ｌ－１５成熟蛋白的ｃＤＮＡ，其大小约３６０ｂｐ。用ＰＥＧ法回收其片段并将其连接到ｐＢＳＳＫ载体的ＳｍａⅠ位点上进行序列分析，结果表明其序列与文献报道一致。然后再将其片段亚克隆插入到ｐＧＥＸ－２Ｔ的ＢａｍＨＩ位点。筛选插入方向正确的克隆，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，以１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导５ｈ收集菌体直接进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，与阴性对照相比，ＭＷ４４ＫＤ处多出一条带，紫外扫描显示此带占菌体蛋白总量的８．８％。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ证实此带能够特异地与兔抗人ＩＬ－１５的抗体发生反应。证明ＲＴ－ＰＣＲ所得的人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ在大肠杆菌中获得了表达，为进一步探讨人ＩＬ－１５的生物学作用打下基础。
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| 关 键 词： | 白细胞介素－15 基因克隆 基因表达 大肠杆菌 |
Cloning of Human Interleukin 15 cDNA and Its Expression in E.coli |
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| Shen Yongquan Cui Lianxian He Wei,Zhao Qing Hu Yu Liu Qingfeng Ba Denian.Cloning of Human Interleukin 15 cDNA and Its Expression in E.coli[J].Basic Medical Sciences and Clinics,1997,17(5):29-32,28. |
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| Authors: | Shen Yongquan Cui Lianxian He Wei Zhao Qing Hu Yu Liu Qingfeng Ba Denian |
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| Keywords: | Interleukin 15 Gene Cloning Gene Expression |
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