| 大鼠bFGF基因荧光定量PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 舒剑波 张瑞 董茵 郭刚. 大鼠bFGF基因荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国骨质疏松杂志, 2008, 14(1): 1-4 |
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| 作者姓名： | 舒剑波 张瑞 董茵 郭刚 |
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| 作者单位： | 天津医科大学代谢霜医院内分泌研究所卫生部与天津市激素与发育重点实验室,300070 |
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| 摘 要： | 目的 建立用荧光定量PCR方法检测大鼠bFGF基因mRNA水平.方法 以Trizol-步法提取新鲜骨组织总RNA,以Oligo(dt)18为引物逆转录产生eDNA并进行扩增,以T-A克隆法将纯化的目的片断与PGEM.T Easy载体连接成重组质粒并转化E.coli DH5a.采用碱裂解法提取重组质粒,经蓝白筛选、酶切、测序鉴定后,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA准确含量,并以靶基因和内参GAPDH mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标.结果 由PGEM.T Easv.bFGF所构建的标准曲线线性关系良好(反应体系中含1×102-1×107拷贝大鼠bFGF基因分子时,扩增反应Ct值与拷贝数的对数成线性关系)、灵敏度高、特异性强、准确可靠.批内和批间重复性测定的变异系数分别为1.03%～4.59%以及2.24%～6.46%.结论 成功建立了用实时荧光定量PCR检测大鼠bFGF基因表达量的方法.
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| 关 键 词： | 碱性成纤维生长因子 SYBR Green I法 实时荧光定量PCR T-A克隆 标准曲线 大鼠 bFGF 基因表达量 实时荧光定量 检测方法 reaction chain quantitative fluorescence mRNA detecting method 变异系数 测定 批间重复性 灵敏度 对数 拷贝数 扩增反应 基因分子 |
| 文章编号： | 1006-7108(2008)01-0001-04 |
| 修稿时间： | 2007-07-09 |
Establishment of the method for detecting rat bFGF mRNA with fluorescence quantitative ploymerase chain reaction |
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