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自杀基因TK腺相关病毒载体的构建及其抑制肿瘤细胞的功能研究
引用本文:于磊,孙岩,雷铭德,李娜,韩瑞发. 自杀基因TK腺相关病毒载体的构建及其抑制肿瘤细胞的功能研究[J]. 中国现代医学杂志, 2010, 20(21)
作者姓名:于磊  孙岩  雷铭德  李娜  韩瑞发
作者单位:天津医科大学第二附属医院,泌尿外科研究所(天津市泌尿外科基础医学重点实验室),天津,300211
摘    要:目的 探讨腺相关病毒(rAAV)-单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)(简称rAAV-TK)载体的构建及其生物学效应的初步鉴定.方法 用PCR扩增TK序列至pAAV-MCS载体,构建pAAV-TK;采用AAV-Helper Free System包装系统、"氯仿-PEG/NaCl沉淀-氯仿抽提"及冰乙醇沉淀法进行AAV的包装、纯化和浓缩,对病毒颗粒进行鉴定;用MB49-PSA细胞对rAAV-TK生物学效应进行初步鉴定.结果 成功构建pAAV-TK载体,并经酶切、PCR及测序验证其准确性;rAAV病毒颗粒滴度达2×1010v.p/mL,浓缩后可达到2 × 1011~2×1012v.p/mL;rAAV-TK可以分泌TK基因,加入药物更昔洛韦(Ganciclovir,GCV)和吉地他滨(Gemcitabine,GVC),该基因能有效诱导膀胱肿瘤细胞MB49-PSA凋亡.结论 成功构建rAAV-TK腺相关病毒,体外实验表明rAAV-TK/GVC/GCV系统能高效诱导膀胱肿瘤细胞的凋亡.

关 键 词:腺相关病毒  单纯疱疹病毒胸苷激酶基因  膀胱肿瘤  更昔洛韦  吉地他滨

Construction of pAAV-TK and identification of its function of anticancer
YU Lei , SUN Yan , LEI Ming-de , LI Na , HAN Rui-fa. Construction of pAAV-TK and identification of its function of anticancer[J]. China Journal of Modern Medicine, 2010, 20(21)
Authors:YU Lei    SUN Yan    LEI Ming-de    LI Na    HAN Rui-fa
Abstract:
Keywords:
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