| 神经母细胞瘤SK-N-SH细胞内DHRS4L2基因一种新选择性剪接亚型S4的克隆和亚细胞定位 |
| |
| 引用本文： | 龚慧,李一凡,祝胜郎,杜冀晖,王磊,周蓓,廉婕,李蓉,麦丽文.神经母细胞瘤SK-N-SH细胞内DHRS4L2基因一种新选择性剪接亚型S4的克隆和亚细胞定位[J].医学分子生物学杂志,2017,14(4). |
| |
| 作者姓名： | 龚慧 李一凡 祝胜郎 杜冀晖 王磊 周蓓 廉婕 李蓉 麦丽文 |
| |
| 作者单位： | 1. 深圳市南山区人民医院/广东医科大学附属深圳第六医院中心实验室和深圳内源性感染重点实验室 广东省深圳市,518052;2. 深圳市南山区人民医院/广东医科大学附属深圳第六医院肾内科 广东省深圳市,518052 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，深圳市科创委基础研究项目，深圳市南山区科技计划项目(No.2014009)This work was supported by grants from the National Natural Science Foundation of China，Basic Research Project of Shenzhen Science and Technology Innovation Committee，Shenzhen Nanshan Science and Technology Research Fundation |
| |
| 摘 要： | 目的 神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系脱氢酶/还原酶(SDR家族)成员4类2dehydrogenase/reductase(SDR family)member 4 like 2,DHRS4L2]基因的一种新的选择性剪接亚型克隆、生物信息学分析及其亚细胞定位.方法 以SK-N-SH细胞cDNA为模板,PCR扩增DHRS4基因簇Ea1转录本.将PCR产物A-T克隆至pGEMT-Easy质粒,对质粒进行DNA Sanger测序.将测序所得序列用NCBI ORF finder分析其编码区,用Motif Scan分析预测蛋白氨基酸序列.用Clustal Omega进行蛋白序列比对分析.将新亚型完整编码框cDNA以及删除偶核定位信号的编码框分别插入pEGFP-C1质粒,所得质粒和空质粒分别转染SK-N-SH细胞,在荧光显微镜下观察转染表达蛋白亚细胞定位.结果 用RT-PCR和Sanger测序方法发现,SK-N-SH表达DHRS4L2 Ea1转录本,未检测到其表达脱氢酶/还原酶(SDR家族)成员4类1dehydrogenase/reductase(SDR family)member 4 like 1,DHRS4L1]的Ea2转录本.DHRS4L2 Ea1表达一个新的选择性剪接亚型DHRS4L2-S4(KU141377),由AY616183基础上在Ea1与E2外显子之间插入新外显子Ej形成,外显子Ej含有新亚型翻译起始密码子ATG.转录本KU141377预测蛋白羧基端具有偶核定位信号(bipartite nuclear localization signal,NLS),提示其可能定位于细胞核.绿色荧光蛋白融合蛋白实验显示,在SK-N-SH细胞该蛋白定位于细胞核.该蛋白还含有一个甘氨酸密集区(glycine-rich region)和阿片样生长因子受体重复(opioid growth factor receptor repeat)序列.结论 研究发现SK-N-SH细胞表达的一种DHRS4L2新选择性剪接亚型KU141377,其预测编码蛋白含有细胞偶核定位信号,融合荧光蛋白实验显示该新亚型定位于细胞核,这为后续研究DHRS4L2在神经母细胞瘤中的潜在功能奠定基础.
|
| 关 键 词： | DHRS4L2基因 选择性剪接 细胞核定位 |
Cloning and Sub-Cellular Localization of A Novel Alternatively Spliced Isoform S4 of DHRS4L2 Gene from Neuroblastoma SK-N-SH Cells |
| |
| GONG Hui,LI Yifan,ZHU Shenglang,DU Jihui,WANG Lei,ZHOU Bei,LIAN Jie,LI Rong,MAI Liwen.Cloning and Sub-Cellular Localization of A Novel Alternatively Spliced Isoform S4 of DHRS4L2 Gene from Neuroblastoma SK-N-SH Cells[J].Journal of Medical Molecular Biology,2017,14(4). |
| |
| Authors: | GONG Hui LI Yifan ZHU Shenglang DU Jihui WANG Lei ZHOU Bei LIAN Jie LI Rong MAI Liwen |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | DHRS4L2 gene alternative splicing nuclear localization |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
