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| 人可溶型破骨细胞分化因子的克隆原核表达及活性分析 | |
| 引用本文： | 杨彤涛,周勇,马保安,杨辉,范清宇,刘继中,陈苏民.人可溶型破骨细胞分化因子的克隆原核表达及活性分析[J].中华风湿病学杂志,2007,11(1):23-26. |
| 作者姓名： | 杨彤涛 周勇 马保安 杨辉 范清宇 刘继中 陈苏民 |
| 作者单位： | 1. 710038,西安,第四军医大学唐都医院骨科 2. 710038,西安,第四军医大学生物化学教研室 3. 710038,西安,第四军医大学,西京医院骨科 |
| 摘 要： | 目的克隆人可溶型破骨细胞分化因子（sODF）基因，构建融合表达载体，在大肠杆菌中表达，并制备抗体。方法采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法得到人可溶型破骨细胞分化因子（ODF）编码区cDNA，克隆入原核表达载体pGEX-4T-3，转化大肠杆菌感受态细胞JM109，0．1mmol／L β—D一半乳糖苷（IPTG）诱导后收集菌体蛋白，行十二烷基硫酸钠-多丙烯酰胺冻胶电泳（SDS—PAGE）。纯化蛋白，体外诱导破骨细胞分化。结果获得人sODF基因cDNA，构建原核表达载体pGEX—ODF，转化菌株可表达人GST—ODF蛋白，蛋白相对分子质量约为43000，Western分析证实为GST—sODF融合蛋白。纯化后的表达产物体外培养人外周血淋巴细胞有破骨细胞形成，象牙片上有骨吸收陷窝形成。结论成功获得人sODF基因cDNA，并在大肠杆菌中表达了人GST-ODF融合蛋白。成功表达的人sODF蛋白有诱导破骨细胞分化的活性。为该蛋白的进一步应用研究提供了依据。 |
| 关 键 词： | 破骨细胞分化因子 原核表达载体 活性分析 可溶型 克隆人 基因cDNA 反转录聚合酶链反应 pGEX-4T-3 |
| 收稿时间： | 2006-04-25 |
Cloning, expression of human soluble osteoclastic differentiation factor and bioactivity analysis of the recombinant protein |
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| YANG Tong-tao,ZHOU Yong,MA Bao-an,YANG Hui,FAN Qing-yu,LIU Ji-zhong,CHEN Su-min.Cloning, expression of human soluble osteoclastic differentiation factor and bioactivity analysis of the recombinant protein[J].Chinese Journal of Rheumatology,2007,11(1):23-26. | |
| Authors: | YANG Tong-tao ZHOU Yong MA Bao-an YANG Hui FAN Qing-yu LIU Ji-zhong CHEN Su-min |
| Abstract: | |
| Keywords: | ODF Cloning and Sequencing Expression |
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