| 大鼠Cx43基因慢病毒表达载体的构建及转染骨髓间充质干细胞表达的观察 |
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| 引用本文： | 李松南,毛晓波,冯义柏,王祥,曾秋棠,毛奕,吉庆伟,彭昱东,郭敏,梁志山.大鼠Cx43基因慢病毒表达载体的构建及转染骨髓间充质干细胞表达的观察[J].临床心血管病杂志,2010,26(11). |
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| 作者姓名： | 李松南 毛晓波 冯义柏 王祥 曾秋棠 毛奕 吉庆伟 彭昱东 郭敏 梁志山 |
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| 基金项目： | 生物靶向治疗湖北省重点实验室课题 |
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| 摘 要： | 目的:构建大鼠缝隙连接蛋白43(Cx43)基因的重组慢病毒表达载体,并转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),观察Cx43的表达。方法:采用RT-PCR技术获得大鼠Cx43基因,并将其连接到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体pGC-FU中,重组获得慢病毒质粒pGC-FU-Cx43,将其与辅助包装质粒(pHelper1.0、pHelper2.0)一起共转染293T细胞,包装生产病毒并测定滴度。所获慢病毒感染大鼠BMSC后,采用荧光显微镜和Western blot方法检测Cx43的表达。结果:酶切证实Cx43基因已定向连入目的载体,测序结果显示,所构建的pGC-FU-Cx43重组慢病毒质粒序列与目标序列完全一致。获得的病毒滴度为2×109TU/ml。经分离、纯化得到BMSC;pGC-FU-Cx43转染BMSC后,可见大量EGFP表达,Cx43的表达量明显增加。结论:成功构建并包装获得较高滴度的重组慢病毒pGC-FU-Cx43。pGC-FU-Cx43可高效转染BMSC,Cx43表达增加,且实现稳定转染。
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| 关 键 词： | 骨髓间充质干细胞 缝隙连接蛋白43 慢病毒 |
Construction of the recombinant lentiviral carrying rat connexin 43 gene and its expression in bone marrow mesenchymal stem cell of rats |
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