RNA干扰技术沉默星形胶质细胞Cdk5模型的建立

目的建立星形胶质细胞细胞周期蛋白依赖性激酶5(Cdk5)沉默模型。方法新生24 h内无特定病原(SPF)级SD雄性大鼠乳鼠240只。培养及鉴定SD雄性大鼠星形胶质细胞。设计合成针对星形胶质细胞Cdk5的小干扰RNA(siRNA)3种(Si-r-Cdk5-001、Si-r-Cdk5-002及Si-r-Cdk5-003),将3种siRNA分为SiT1组、SiT2组、SiT3组,在Lipofectamine 2000介导下转染星形胶质细胞;阴性对照组加入阴性对照si RNA。应用荧光染色观察转染效率,通过实时聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测沉默效率。结果成功将Cdk5 siRNA转染入星形胶质细胞,转染效率为85%。与阴性对照组相比,SiT1组、SiT2组及SiT3组Cdk5 mRNA及蛋白表达均降低(P0.01),其中SiT3组沉默效果最佳,分子水平沉默效率为68%,蛋白水平沉默效率为79%。结论成功通过RNA干扰技术建立星形胶质细胞Cdk5特异性沉默模型。