RelB基因沉默的髓源树突状细胞负载Tα146~162 对TAChR预致敏T细胞免疫反应的影响

目的：探讨RelB基因沉默的髓源树突状细胞(BMDC)负载电鳗乙酰胆碱受体(TAChR)优势肽段Tα146~162在TAChR预致敏C57BL/6小鼠中能否诱导免疫耐受。方法：制备产生RelB siRNA分子的重组慢病毒和对照病毒。慢病毒感染BMDC后，给予LPS刺激，相应的DC命名为DC-siRelB和DC-control。应用实时定量PCR和Western印迹分析细胞中RelB表达，流式细胞仪检测细胞表型，ELISA检测上清白细胞介素(IL)-12水平。36只C57BL/6小鼠随机分为A1，A2，A3，K1，K2，K3共6组。实验前1天，A1~A3组用TAChR+完全福氏佐剂(CFA)致敏；K1~K3组用钥孔戚血清蛋白(KLH)+CFA致敏。第7天，A2和K2组注射Tα146~162脉冲的DC-siRelB；A3和K3组注射Tα146~162脉冲的DC-control;A1和K1组给予PBS。第14天，3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应。结果：成功构建了含RelBshRNA基因的重组慢病毒，RelB siRNA可显著下调DC中RelB的表达。与DC-control相比，DC-siRelB中CD80，CD86，MHCII表达及IL-12水平显著降低。与A1和A3组相比，A2组TAChR刺激下淋巴细胞增殖反应显著降低(P<0.05)，ConA和KLH刺激下淋巴细胞增殖反应差异无统计学意义(P>0.05)。K1，K2和K3组在KLH刺激下淋巴细胞增殖反应差异均无统计学意义(P>0.05)。结论：慢病毒介导的RelB基因沉默的BMDC可抵制成熟诱导反应并能在TAChR预致敏的C57BL/6小鼠中诱导抗原特异性免疫耐受，为研究其用于治疗重症肌无力奠定了基础。