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短发夹RNA对胰腺癌细胞PANC-1突变型K-ras基因表达的影响
引用本文:李冬斌,郑志刚,许香梅,郭华,赵雪莲,黄林凤,蔡建辉.短发夹RNA对胰腺癌细胞PANC-1突变型K-ras基因表达的影响[J].世界华人消化杂志,2008,16(35):3941-3945.
作者姓名:李冬斌  郑志刚  许香梅  郭华  赵雪莲  黄林凤  蔡建辉
作者单位:1. 河北医科大学第二医院胃肠外科,河北省,石家庄市,050000
2. 河北省石家庄市第一医院河北省,石家庄市,050011
3. 河北省石家庄市中心医院,河北省,石家庄市,050011
4. 河北医科大学第二医院整形外科,河北省,石家庄市050000
5. 河北衡水市第三人民医院,河北省,衡水市,053100
摘    要:目的:研究短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对人胰腺癌细胞PANC-1中突变型K-ras基因表达的抑制作用.方法:构建特异性针对胰腺癌PANC-1细胞突变型K-ras基因的重组质粒pGensil-1-P1,阴性对照质粒pGensil-1-HK并采用脂质体介导的方法转染胰腺癌细胞.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测K-ras基因mRNA和蛋白的表达,CCK-8方法测量细胞生长曲线.并建立人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠皮下移植瘤模型,分别注射Pgenesil-1-P1、Pgenesil-1-HK质粒,动态观察并处死裸鼠计算肿瘤体积.结果:测序证实质粒表达载体构建成功,短发夹RNA(shRNA)使胰腺癌细胞PANC-1突变型K-ras基因的mRNA较未治疗组、阴性对照组相比明显减少(P=0.01);未治疗组、阴性对照组及治疗组的K-ras蛋白表达率分别为100%,99.0%±0.73%,39.9%±2.1%,前两组K-ras蛋白表达差异无统计学意义,治疗组较未治疗组K-ras蛋白表达下调了约60.1%;细胞生长受到明显抑制(P=0.02);经重组质粒治疗14 d后,裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,相较于对照组瘤体明显缩小(P=0.03).结论:shRNA对特异性转染组的胰腺癌细胞的突变K-ras基因表达有抑制作用,使细胞以及裸鼠移植瘤的生长受到抑制.

关 键 词:胰腺癌  RNA干扰  短发夹RNA

Effect of short hairpin RNA on K-ras expression in human pancreatic cancer cell line
Dong-Bin Li,Zhi-Gang Zheng,Xiang-Nei Xu,Hua Guo,Xue-Lian Zhao,Lin-Feng Huang,Jian-Hui Cai.Effect of short hairpin RNA on K-ras expression in human pancreatic cancer cell line[J].World Chinese Journal of Digestology,2008,16(35):3941-3945.
Authors:Dong-Bin Li  Zhi-Gang Zheng  Xiang-Nei Xu  Hua Guo  Xue-Lian Zhao  Lin-Feng Huang  Jian-Hui Cai
Abstract:
Keywords:K-ras
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