| 人胰腺癌抑制消减cDNA文库的构建 |
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| 引用本文： | 蒋业贵,李兆申,屠振兴,龚燕芳,金晶.人胰腺癌抑制消减cDNA文库的构建[J].中华胰腺病杂志,2004,4(4). |
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| 作者姓名： | 蒋业贵 李兆申 屠振兴 龚燕芳 金晶 |
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| 作者单位： | 200433,上海,第二军医大学长海医院消化内科 |
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| 摘 要： | 目的应用抑制消减杂交技术(SSH)构建胰腺癌和正常胰腺组织间差异表达的抑制消减cDNA文库.方法分别提取胰腺癌(tester)和癌旁正常胰腺组织(driver)中的总RNA和mRNA,合成双链cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将胰腺癌双链cDNA分为两组,分别加上不同的接头,再与正常胰腺组织cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,分离出胰腺癌差异表达基因的cDNA片段.将该差异表达片段克隆至T/A载体,并转化大肠杆菌TOP 10F',经蓝白斑筛选后,再用PCR方法筛选阳性克隆,从而构建胰腺癌抑制消减cDNA文库.结果文库扩增后得到257个白色克隆,随机挑取50个阳性克隆进行PCR扩增分析,其中47个克隆有插入片段,克隆阳性率为94%,片段大小主要集中在300～600bp之间.结论成功构建了人胰腺癌抑制消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆胰腺癌特异性表达基因奠定了基础.
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| 关 键 词： | 胰腺癌 抑制消减杂交 cDNA文库 |
Construction of suppressive subtractive cDNA library of human pancreatic cancer |
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