牙髓干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

目的:探讨牙髓干细胞移植治疗脊髓损伤的神经修复及运动功能恢复情况.方法:培养取材第2代来源于第三磨牙的人牙髓于细胞,鉴定其表面标记物,应用B27、碱性呈纤维细胞生长因子和胰岛素转铁蛋白硒进行神经诱导,并行免疫荧光染色检测.改良Allen's法制作SD大鼠脊髓损伤模型,3d后随机分为实验组及对照组,每组各20只大鼠.分别于脊髓损伤处注入人牙髓干细胞及生理盐水,于造模后1d、治疗前1d、治疗后3d、治疗后7、14、28d进行动物后肢运动功能检测.28d时脊髓取材进行HE染色,观察脊髓空洞形成,计算空洞面积;Tunnel法检测两组细胞凋亡情况;免疫荧光双标法标记HuNu-NeuN和HuNu-GFAP,观察人牙髓干细胞体内生长分化情况.结果:细胞培养传代后呈长梭形,细胞形态均匀,胞浆丰富、胞核增大,细胞平行排列呈漩涡状或螺旋状.流式细胞仪分析人牙髓干细胞诱导分化后高表达CD44、CD90和CD146,低表达STRO-1,CD34、CD45表达阴性.人牙髓干细胞神经诱导14d,免疫荧光标记GFAP、NeuN呈阳性.细胞移植3d、7d,两组间BBB评分无统计学差异;细胞移植14d及28d实验组BBB评分分别为3.8±0.8、7.2±1.6,对照组BBB评分为2.2±0.8、3.6±1.1,两组间比较差异有显著性(P＜0.05).28d时HE染色两组均可见脊髓出血、炎性细胞浸润、小血管增生及空洞形成.实验组脊髓空洞面积百分比(26.75±2.50)％,对照组为(49.50±6.25)％,两组差异有统计学意义(P＜0.05);Tunnel法检测实验组神经细胞凋亡百分比(32.33±1.54)％,对照组为(46.33±1.53)％,实验组显著减少神经细胞的凋亡(P＜0.05).免疫荧光双标法检测到部分细胞为带有HuNu-NeuN和HuNu-GFAP双抗体细胞.结论:人牙髓干细胞能够在体外特定条件下及移植入脊髓损伤大鼠体内可分化为神经细胞,用于治疗脊髓损伤时可减少神经细胞的凋亡,促进后肢运动功能的恢复.

Research on dental pulp stem cells in the treatment of spinal cord injury in rat