内皮素1增高对大鼠大脑皮质神经元凋亡的作用

背景：作为一种强效血管和神经活性肽，内皮素1在各种中枢神经系统病理生理情况下表达增加，可能对神经组织产生有害作用。然而，增高的内皮素1有无直接诱导神经元凋亡的作用尚不清楚。目的：观察内皮素1有无直接诱导原代培养神经元凋亡的作用。设计：以细胞为研究对象，完全随机对照实验研究。单位：一所大学医院的神经内科和一所大学的病理学教研室、生命科学技术学院组织与移植免疫实验中心。材料：实验于2001-03／2002-02在暨南大学医学院病理教研室和生命科学和技术学院组织移植与免疫研究所实验室进行。来自于新生大鼠大脑皮质的原代神经元培养，新生大鼠由中山大学医学中心动物研究所提供。干预：原代大脑皮质神经元培养5d后分别加入0．2，20nmol／L内皮素1处理24h，用Annexin V，Hoechst 33258染色半定量测定细胞凋亡。再用流式细胞仪分别定量检测内皮素受体A拮抗剂或内皮素受体B拮抗剂对20nmol／L内皮素1诱导神经元凋亡的效果。对照组加入等量磷酸盐缓冲液。主要观察指标：观察内皮素1直接诱导培养神经元凋亡的作用，以及其通过的ET受体亚型。结果：加入0．2nmol／L内皮素124h后，Annexin-V和Hoechst 33258阳性染色细胞率分别为(23．00&;#177;9．96)％，(9．82&;#177;0．95)％，与对照组相比差异无显著性意义[(Annexin-V：(13．50&;#177;3．35)％；Hoechst 33258(8．21&;#177;2．17)％1。加入20nmol／L后24h，Annexin-V以及Hoechst 33258染色阳性细胞率(50．50&;#177;10．78)％，(13．78&;#177;1．52)％显著增高，与对照组比较，差异有显著性意义。流式细胞仪检测对照组和20nmol／L内皮素1组凋亡率分别为(0．20&;#177;0．15)％和(26．11&;#177;3．28)％；内皮素受体A拮抗剂，内皮素受体B拮抗剂分别部分阻断了内皮素1诱导培养神经元凋亡的作用，内皮素受体A拮抗剂+内皮素1组凋亡率为(13．58&;#177;4．92)％，内皮素受体B拮抗剂+内皮素1组为(9．99&;#177;3．30)％，与内皮素1组比较，差异有显著性意义。结论：较高浓度的内皮素1(20nmol／L)可直接诱导培养大鼠大脑皮质神经元凋亡，其作用可能是通过其A受体和B受体亚型共同实现的。