| 人Ⅱ型穿膜蛋白CD74基因片段的克隆及原核表达 |
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| 作者姓名： | 单志新 林秋雄 符永恒 余细勇 |
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| 作者单位： | 广东省人民医院医学研究中心,广东,广州,510080 |
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| 基金项目： | 广东省自然科学科学基金团队基金资助项目(015015);广东省自然科学科学基金资助项目(033189);广东省人民医院科技基金资助项目(Y03003) |
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| 摘 要： | [目的]扩增、克隆人Ⅱ型穿膜蛋白CD74基因片段,并在大肠杆菌中表达出具有生物活性的重组CD74蛋白.[方法]根据人CD74基因序列,设计、合成PCR引物,利用RT-PCR技术,从人Raji B细胞中扩增CD74基因片段.将CD74基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达载体pGEX-4T-CD74,并转化工程菌BL21(DE3).用IPTG诱导BL21(DE3)中导入的CD74基因的表达,并行SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.用GSTrap亲合柱纯化重组CD74蛋白,通过体外血管生成实验鉴定重组CD74蛋白对巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的阻断作用.[结果]扩增出人CD74基因片段,并成功构建了重组质粒pGEX-4T-CD74.测序结果显示,克隆的CD74 cDNA长480 bp,序列与文献报道一致.经IPTG诱导,特异表达出可溶性的44 KDa的重组蛋白,其可被人CD74抗体识别.体外血管生成实验结果显示,重组CD74蛋白能特异地阻断MIF的促血管生成作用.[结论]克隆了人CD74基因片段,并在大肠杆菌中表达出具有生物活性的重组CD74蛋白.
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| 关 键 词： | CD74 人巨噬细胞移动抑制因子 克隆,分子 基因表达 |
| 文章编号： | 1672-3554(2005)3S-0035-03 |
| 修稿时间： | 2005-03-01 |
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