八肽胆囊收缩素刺激神经元所致信号转导中磷蛋白的动力学变化研究

目的 研究八肽胆囊收缩素（Octa—cholecystokinin，CCK8）刺激小鼠神经元所致信号转导中磷酸化蛋白的时间动力学特征。方法 培养乳小鼠神经元，随机分为CCK8刺激组和对照组，^32P-NaH2PO4标记后分别给予CCK8（10^-7mol／L）和等量无磷培养基，作用不同时间后液氮终止反应，经双向电泳、放射自显影，获得磷酸化蛋白质的电泳图谱。利用PDQuest 2D分析软件并结合Swiss—Prot蛋白质数据库对磷酸化蛋白质斑点进行分析并绘制出一些重要的磷酸化蛋白质磷酸化改变的时间动力学曲线。结果 CCK8作用不同时间后。神经元蛋白质磷酸化水平出现明显改变，通过对双向电泳图谱中100多个蛋白质斑点的定性分析，初步确定了小鼠神经元CCK8信号转导相关磷酸化蛋白包括多种蛋白激酶、磷蛋白磷酸酶、胞内信号分子、多种受体、转录因子及核蛋白等。对其中11种重要的信号分子动力学分析结果显示：曲线多数呈峰型，且蛋白质分子磷酸化达到峰值时间和高磷酸化状态持续时间各不相同，而PKAα表现为较持续的激活状态。MK07、GBOα仅则呈现双峰型。结论 CCK8在神经元的信号转导具有整合与复杂自适应控制的特征。

Dynamic characteristics of phosphoproteins relevant with CCK8 signalling transduction in neurons of mice