南蛇藤提取物调控Lgr5/Wnt/β-catenin信号通路逆转胃癌前病变的机制

目的 基于胃类器官损伤模型探究南蛇藤提取物（COE）调控富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5 （Lgr5）/配体分泌介质（Wnt）/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路影响胃类器官增殖分化及Lgr5表达从而逆转胃癌前病变（PLGC）的作用机制。方法 通过小鼠胃腺体干细胞建立胃类器官，使用N-甲基-N''-硝基-N-亚硝基胍（MNNG，0.02 mg·L^-1）处理胃类器官构建胃类器官损伤模型；将胃类器官损伤模型随机分为正常组、模型组（0.02 mg·L^-1 MNNG）、COE低、中、高质量浓度组（5、10、20 mg·L^-1）、Wnt抑制剂Dickkopf相关蛋白1（DKK1）（0.5 mg·L^-1）组并分别用不同药物处理24 h；镜下观察不同药物浓度胃类器官的数量与体积；采用噻唑蓝（MTT）比色法检测胃类器官损伤模型活力；采用苏木素-伊红（HE）染色法观察胃类器官形态与病理学；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测不同药物浓度胃类器官中Lgr5、黏蛋白2 （MUC2）、黏蛋白5AC （MUC5AC）、黏蛋白6 （MUC6）、Wnt和β-catenin表达情况。结果 与正常组比较，模型组胃类器官数量显著减少（P<0.01），体积显著减小（P<0.01），活力显著降低（P<0.01），Lgr5、MUC2、Wnt与β-catenin表达显著升高（P<0.01），MUC5AC、MUC6表达显著降低（P<0.01）。与模型组比较，COE低、中、高质量浓度组胃类器官数量及体积均显著升高（P<0.01）；胃类器官活力显著增强（P<0.01），且在COE质量浓度为20 mg·L^-1时效果最显著（P<0.01）；COE中、高质量浓度组Lgr5、MUC2表达显著降低（P<0.01），COE低、中、高质量浓度组MUC5AC、MUC6的表达明显升高（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，Wnt抑制剂能够明显促进胃类器官MUC5AC、MUC6的表达（P<0.05，P<0.01），显著降低MUC2、Wnt与β-catenin的表达（P<0.01），COE高质量浓度与Wnt抑制剂共同使用能够促进这一趋势（P<0.01）。结论 COE通过抑制Lgr5、MUC2、Wnt、β-catenin的表达和促进MUC5AC及MUC6的表达，抑制Wnt/β-catenin通路，促进胃类器官增殖分化，逆转PLGC过程。