四逆散调控GSK-3β/A20/C/EBPβ抑制小胶质细胞激活改善抑郁模型小鼠抑郁样行为

目的 探讨四逆散通过调控糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）/肿瘤坏死因子-α诱导蛋白3（A20）/CCAAT增强子结合蛋白β（C/EBPβ）抑制小胶质细胞激活发挥抗抑郁作用。方法 将72只雄性C57/6J小鼠随机分出正常组、模型组、氟西汀组（5.0 mg·kg^-1）、四逆散低、中、高剂量组（4.9、9.8、19.6 g·kg^-1），每组12只。适应性喂养1周后，采用慢性不可预知温和应激（CUMS）建立抑郁模型，第5周开始进行药物治疗4周。第9周进行行为学实验，包括蔗糖偏好实验、旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测皮质白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、一氧化氮合酶（iNOS）炎症蛋白的表达水平和GSK-3β、A20、C/EBPβ的表达水平。利用免疫荧光法检测皮质小胶质细胞的M1型极化标志物离子钙结合衔接分子1（Iba1）和巨噬细胞抗原（CD68）的荧光表达。结果 CUMS造模8周后，与正常组比较，模型组小鼠蔗糖偏好率显著降低（P<0.01），旷场实验中央区域活动显著减少（P<0.01），在高架十字迷宫实验开臂区域的活动明显减少（P<0.05），强迫游泳的不动时间显著增加（P<0.01）；炎症蛋白IL-1β、IL-6、iNOS的表达水平显著升高（P<0.01），Iba1和CD68的荧光共定位的指数升高（P<0.05）；GSK-3β蛋白表达水平升高（P<0.05），C/EBPβ蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。药物干预4周后，与模型组比较，四逆散组小鼠糖水偏好率显著提高（P<0.01），旷场实验和高架十字迷宫实验中在中央区域和开臂区域的活动明显增加（P<0.05），四逆散中、高剂量组小鼠在强迫游泳实验中不动时间显著减少（P<0.01）；IL-1β、IL-6、iNOS的蛋白表达水平明显下降（P<0.05），四逆散高剂量组Iba1和CD68的荧光共定位的指数明显下降（P<0.05）；四逆散中、高剂量组GSK-3β、C/EBPβ的蛋白表达水平显著下降（P<0.01），A20的蛋白表达显著上调（P<0.01）。结论 四逆散抗抑郁作用与调控GSK-3β/A20/C/EBPβ蛋白的表达，抑制小胶质细胞M1型激活有关。