加味当归贝母苦参丸对H22肝癌荷瘤小鼠抑瘤及T细胞免疫调节作用

目的 探讨加味当归贝母苦参丸对H22肝癌荷瘤小鼠抑瘤及T细胞免疫调节作用，为加味当归贝母苦参丸联合免疫检查点抗体治疗肝癌提供依据。方法 建立H22肝癌荷瘤小鼠模型，随机分为模型组、顺铂组、加味当归贝母苦参丸低、中、高剂量组（4、8、16 g·kg^-1·d^-1），连续给药14 d，第15天处死小鼠。给药第0、4、8、12、15天测量肿瘤体积；称取瘤重、计算胸腺指数和脾指数；将脾脏淋巴细胞与H22肝癌细胞共培养，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测肿瘤细胞增殖抑制率；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测脾脏和肿瘤组织中程序性细胞死亡蛋白-1（PD-1）、淋巴细胞活化基因-3（LAG-3） mRNA的表达情况；免疫组织化学法（IHC）检测脾脏和肿瘤组织中CD4⁺、CD8⁺ T细胞数量及PD-1、LAG-3蛋白的表达情况。结果 给药后第8天，各给药组肿瘤体积较模型组均有不同程度下降，第15天肿瘤体积和瘤重均较模型组显著降低（P<0.01），其中顺铂组下降最为明显。与模型组、顺铂组比较，加味当归贝母苦参丸中、高剂量组胸腺指数显著升高（P<0.01）；与模型组比较，各用药组脾脏指数均明显升高（P<0.05，P<0.01），其中顺铂组升高最为显著；与模型组、顺铂组比较，加味当归贝母苦参丸各组脾脏、肿瘤组织中CD4⁺、CD8⁺ T细胞数量和肿瘤细胞杀伤率均显著增高（P<0.01），LAG-3 mRNA和蛋白表达均明显降低（P<0.05，P<0.01）；加味当归贝母苦参丸高剂量组肿瘤组织中PD-1 mRNA表达较模型组、顺铂组显著降低（P<0.01）。结论 加味当归贝母苦参丸可能通过下调LAG-3表达，促进H22肝癌荷瘤小鼠CD4⁺、CD8⁺ T细胞的增殖并向肿瘤微环境浸润，从而改善T细胞免疫活性、抑制肿瘤生长，为加味当归贝母苦参丸与免疫检查点抗体联用治疗肝癌提供实验依据。

Modified Danggui Beimu Kushen Pills Inhibit Tumor Growth and Regulates T Cell Subsets in H22 Hepatocellular Carcinoma-bearing Mice