基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路探讨补中益气汤干预NOD.H-2h4小鼠AIT细胞焦亡的机制

目的 基于NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）/胱天蛋白酶-1（Caspase-1）/消皮素D（GSDMD）通路探讨补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎（AIT）小鼠细胞焦亡的作用机制。方法 60只NOD.H-2^h4小鼠分为正常组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量（4.10、8.19、16.38 g·kg^-1）组和硒酵母片（0.26 mg·kg^-1）组，每组10只。除正常组外，其余各组均给予0.05% 碘化钠（NaI）灌胃8周造模，继续给药干预8周。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清甲状腺过氧化物酶抗体（TPO-Ab）、甲状腺球蛋白抗体（TgAb）水平；苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠甲状腺组织病理学改变；免疫组化法检测甲状腺组织中NLRP3、Caspase-1、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测甲状腺组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测甲状腺组织中细胞焦亡相关蛋白水平。结果 与正常组比较，模型组小鼠血清TPO-Ab、TgAb水平显著升高（P<0.01），甲状腺滤泡或增大呈立方状，或破坏萎缩，滤泡周围可见大量淋巴细胞浸润；与模型组比较，给药组TPO-Ab、TgAb水平显著降低（P<0.01），滤泡形态结构有所改善，淋巴细胞浸润程度有所减轻，其中补中益气汤中剂量组降低和改善效果最为明显。与正常组比较，模型组小鼠甲状腺组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白阳性产物和mRNA表达显著增加（P<0.01），NLRP3、剪切的（cleaved） Caspase-1、IL-1β、IL-18、GSDMD-N蛋白表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，给药组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白阳性产物和mRNA表达明显降低（P<0.05，P<0.01），其中补中益气汤中剂量组降低效果最为明显，给药组NLRP3、cleaved Caspase-1、IL-1β、IL-18、GSDMD-N蛋白表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论 补中益气汤可改善AIT，其机制可能是通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路抑制细胞焦亡实现的。

Mechanism of Buzhong Yiqitang Intervening in Pyroptosis of AIT in NOD.H-2h4 Mice Based on NLRP3/Caspase-1/GSDMD Pathway