去氢毛钩藤碱抗突变型p53（R273H）结直肠癌的体外作用机制研究

目的 从抑制结直肠癌细胞HT29增殖角度研究去氢毛钩藤碱（hirsuteine，HST）对突变型p53（R273H）结直肠癌的体外抗癌作用机制。方法 采用MTT和平板克隆形成实验评价HST对HT29细胞增殖的影响；流式细胞术和丹酰尸胺（dansylcadaverine，MDC）染色法检测细胞周期分布和自噬情况；Western blotting、qRT-PCR分析细胞中p53蛋白、mRNA表达水平和p53下游效应子的表达情况；放线菌酮（actidione，CHX）-chase实验检测p53蛋白半衰期；染色质免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation，ChIP）实验检测p53与其下游靶基因p21启动子区的结合情况。结果 HST显著抑制突变型p53（R273H）结直肠癌HT29细胞增殖，引起细胞周期阻滞，诱导杀伤性细胞自噬，缩短突变型p53（R273H）蛋白半衰期，诱导其发生MDM2介导的泛素-蛋白酶体降解，增强其与p21启动子的结合，并上调p21的mRNA表达。结论 HST能够促进HT29细胞中突变型p53（R273H）降解并恢复p53野生型转录激活功能，其体外抗结直肠癌活性可能与p53通路密切相关。

In vitro anticancer mechanism of hirsuteine on mutant p53 (R273H) colorectal cancer