livinβ-siRNA表达载体的构建及其在人星形胶质瘤细胞中的稳定表达 |
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引用本文: | 石全红,詹傲,崔荣周,王佳.livinβ-siRNA表达载体的构建及其在人星形胶质瘤细胞中的稳定表达[J].中国局解手术学杂志,2013,22(3):250-253,256. |
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作者姓名: | 石全红 詹傲 崔荣周 王佳 |
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作者单位: | 1. 重庆医科大学附属第一医院神经外科,重庆,400016 2. 重庆医科大学附属大学城医院妇产科,重庆,401331 |
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摘 要: | 目的构建livinβ-siRNA表达载体,并观察其在人星形胶质瘤细胞(U251)中对livinβ基因表达的抑制。方法根据livinβ序列设计2条livinβ-siRNA特异性序列,PCR扩增方法合成2条siRNA链,与质粒pGenesil-11重组构建livinβ-siRNA表达载体,脂质体法转染人星形胶质瘤细胞(U251),RT-PCR和Western blot检测细胞中livinβ基因及蛋白表达。结果对重组质粒的双酶切鉴定和测序结果证明,livinβ-siRNA表达载体pGenesil-11-livinβ-siRNA构建成功;RT-PCR检测转染组细胞中livinβmRNA表达水平明显低于对照组及空载体组,Western blot检测转染组细胞中livin蛋白表达水平明显低于对照组及空载体组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论本实验成功构建了livinβ-siRNA表达载体pGenesil-11-livinβ-siRNA,并且该载体能在真核细胞人星形胶质瘤细胞(U251)中稳定表达,并能抑制livinβ基因表达。
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关 键 词: | livinβ siRNA 胶质瘤细胞 质粒pGenesil-11 |
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