RKIP过表达对儿童白血病CCRF-CEM细胞系凋亡的影响

目的观察Raf激酶抑制蛋白（RKIP）对儿童白血病细胞系CCRF-CEM凋亡的影响。方法以RT-PCR方法从HepG2细胞总RNA中克隆RKIP基因CDS区,并亚克隆至pCDNA3.0质粒,构建RKIP重组质粒载体pCD-NA3.0-RKIP,以电穿孔法转染pCDNA3.0-RKIP与对照质粒pCDNA3.0至儿童白血病细胞系CCRF-CEM,建立过表达RKIP的细胞系。Western blot法检测转染48 h后细胞RKIP与磷酸化ERK的表达水平。转染72 h后,用Annex-in-V与PI双标、流式细胞仪检测细胞凋亡比例。结果成功构建携带RKIP的重组质粒载体pCDNA3.0-RKIP,通过电穿孔转染,在CCRF-CEM细胞成功高表达。与对照细胞相比,RKIP过表达CCRF-CEM细胞磷酸化ERK水平降低,凋亡比例显著增高（P〈0.01）。结论 RKIP过表达诱导CCRF-CEM细胞凋亡,可能机制是通过抑制Ras-ERK信号通路。