| 摘 要： | 目的探讨香兰素(vanillin,Van)对新生大鼠低氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的影响及作用机制。方法将7日龄SD大鼠根据改良的Rice-Vannucci法构建HIBD模型,将120只新生大鼠随机分为5组:假手术(Sham)组、HIBD组、HIBD+Van (20 mg·kg~(-1))组、HIBD+Van (40mg·kg~(-1))、HIBD+Van (80 mg·kg~(-1))组,每组30只,香兰素处理组大鼠分别按照对应剂量腹腔内注射香兰素,每12h注射一次,连续注射2d,假手术组和HIBD组大鼠同时注射等量无菌生理盐水。 48h后将各组大鼠麻醉后断头处死,收集脑组织计算脑组织含水量,TTC染色检测梗死面积,苏木精-伊红染色观察脑组织病理学变化,酶联免疫吸附法(enzyme linked immune sorbent assay,ELISA)检测脑组织中白细胞介素-1 β (interleukin-1 β,IL-1 β)、白细胞介素-6 (interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10 (interleukin-10,IL-10)及肿瘤坏死因子-a (tumor necrosis factor,TNF-α)含量,免疫荧光染色检测脑组织微管相关蛋白1 轻链 3 (microtubule-associated protein 1 light chain3,LC3)表达,蛋白质印迹(Western blot)检测脑组织自噬相关蛋白表达,实时定量PCR和Western blot检测PTEN诱导假定激酶1 (PTEN induced putative kinase1,PINK1) mRNA与蛋白表达。结果与Sham组比较,HIBD组大鼠脑组织含水量显著增加(P0.05),脑梗死面积显著增加(P0.05),炎症细胞因子TNF-α、IL-1 β与IL-6含量显著增加而抗炎因子IL-10含量显著降低(P0.05),LC3荧光表达强度增加,Beclin-1蛋白表达水平和LC3-II/LC3-I 比值显著升高(P0.05),P62蛋白表达水平显著下降(P0.05),同时,脑组织中PINK1mRNA与蛋白的表达水平均显著升高(P0.05)。与HIBD组比较,不同剂量香兰素(20 mg·kg~(-1)、40 mg · kg~(-1)、80 mg·kg~(-1))作用下,大鼠脑组织含水量显著下降(P0.05),脑梗死面积显著减小(P0.05),炎症细胞因子TNF-α、IL-1β与IL-6含量显著下降而抗炎因子IL-10含量显著升高(P0.05),LC3荧光表达强度减弱,Beclin-1蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低(P0.05),P62蛋白表达水平显著升高(P0.05),而PINK1mRNA与蛋白的表达水平均显著降低(P0.05)。结论香兰素具有改善新生大鼠低氧缺血性脑损伤、减轻炎症反应的作用,其机制可能抑制自噬及PINK1信号途径激活相关。
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